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人類淋巴母細胞建株要點

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08
l、4ml肝素抗凝血于離心管中,加入2ml RPMI 1640。
2、混勻后沿管壁緩慢加到預置有4ml淋巴細胞分離液的液面上靜置30min。
3、1500rpm,15min,吸取白細胞層(第二層)于另一離心管中。
4、加RPMI 1640 5ml洗滌白細胞兩次。
5、將白細胞接種至1ml RPMI 1640培養基中,加入10μl環胞霉素和100μl的EBV(EB病毒)液,混勻。
6、水浴搖床,40次/分,37℃,3hr。
7、1500rpm,15min。將細胞接種至1ml培養基中(內含谷氨酰胺1mM/ml)加入10μl環胞霉素,輕輕混勻,37℃培養。
8、5天后觀察細胞轉化和生長情況,決定是否半量換液。一般半量換液l—2次,并維持環胞霉素的濃度。
9、待轉化細胞數量明顯上升,并出現細胞團塊后,可轉入25ml細胞培養瓶中,加1—2ml培養基,37℃培養10—15天,一般每隔3—4天觀察一次,決定是否換液,傳代。
10、細胞生長達一定數量后凍存,凍存前應進行核型分析和存檔。
 
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