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傳代細胞培養

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

(一)原理
體外培養的原代細胞或細胞株要在體外持續地培養就必須傳代,以便獲得穩定的細胞株或得到大量的同種細胞,并維持細胞種的延續。培養的細胞形成單層匯合以后,由于密度過大生存空間不足而引起營養枯竭,將培養的細胞分散,從容器中取出,以1:2或l:3以上的比率轉移到另外的容器中進行培養,即為傳代培養。
細胞“一代”指從細胞接種到分離再培養的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經過三個階段:游離期、指數增生期和停止期。
常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數/100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。細胞接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力最好時期,稱指數增生期(對數生長期),適宜進行各種試驗。
(二)操作
1.將長成單層的原代培養細胞或HeLa細胞從二氧化碳培養箱中取出,在超凈工作臺中倒掉瓶內的培養液,加入少許消化液。(以液面蓋住細胞為宜),靜置5~10分鐘。
2.在倒置鏡下觀察被消化的細胞,如果細胞變園,相互之間不再連接成片,這時應立即
在超凈臺中將消化液倒掉,加入3~5ml新鮮培養液,吹打,制成細胞懸液。
3.將細胞懸液吸出2ml左右,加到另一個培養瓶中并向每個瓶中分別加3ml左右培養液,蓋好瓶塞,送回二氧化碳培養箱中,繼續進行培養。
(三)結果
一般情況,傳代后的細胞在2小時左右就能附著在培養瓶壁上,2~4天就可在瓶內形成單層,需要再次進行傳代。

 

 
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