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酵母活體染色

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-26
1)核DNA和線粒體DNA
1.當細胞培養到約107細胞/ml時,離心(5秒)收集細胞,再懸浮在70%乙醇中。
2.固定5分鐘或5分鐘以上,用水洗2次。
3.將細胞懸浮在含有50ng/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚的封固劑中。1mg/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚母液可在-20℃下貯存。
4.用紫外濾片觀察。
2)線粒體
1.在生長培養基中培養細胞達到約107細胞/ml時,加入100ng/ml 3,3’-二已基噁羰花青碘化物(DiOC6,Sigma D3652或Molecular Probes)用乙醇把1mg/ml母液稀釋到1/104
2.培養5分鐘或5分鐘以上,用熒光素濾片觀察。
3)液泡
1.當細胞生長到約107細胞/ml時,離心收集細胞(5秒),懸浮在含有50mmol/L檸檬酸鈉(pH4.0)的YPD中。
2.加CDCFDA(羧基-2’,7’-二氯-熒光素雙乙酸鹽)到終濃度為10μmol/L。
3.保溫10分鐘或10分鐘以上,用熒光濾片觀察。
4)牙痕和幾丁質
1.用生長培養基培養細胞達107細胞/ml時,加100μg/ml Calcofluor(熒光發光劑28;Sigma F3543)(用水將1mg/ml母液稀釋到1/10,母液可在-20℃下黑暗保存數星期)。
2.培養5分鐘或5分鐘以上,用水洗2次,用紫外濾片觀察。
 
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