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分辨熒光分析法

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08
  時間分辨熒光分析法(Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA)是近十年發展起來的一測微量分析方法,是目前最靈敏的微量分析技術,其靈敏度高達10-19,較放射免疫分析(RIA)高出3個數量級。
  時間分辨熒光分析法(TRFIA)實際上是在熒光分析(FIA)的基礎上發展起來的,它是一種特殊的熒光分析。熒光分析的利用了熒光的波長與其激發波長的巨大差異克服了普通紫外-可見分光分析法中雜色光的影響,同時,熒光分析與普通分光不同,光電接受器與激發光不在同一直線上,激發光不能直接到達光電接受器,從而大幅度的提高了光學分析的靈敏度。但是,當進行超微量分析的時候,激發光的雜散光的影響就顯得嚴重了。因此,解決激發光的雜散光的影響成了提高靈敏度的瓶頸。
  解決雜散光影響的最好方法當然是測量時沒有激發光的存在。但普通的熒光標志物熒光壽命非常短,激發光消失,熒光也消失。不過有非常少的稀土金屬(Eu、Tb、Sm、Dy)的熒光壽命較長,可達1-2ms,能夠滿足測量要求,因此而產生了時間分辨熒光分析法,即使用長效熒光標記物,在關閉激發光后再測定熒光強度的分析方法。
  平時常用的稀土金屬主要是Eu(銪)和Tb(鋱),Eu熒光壽命1ms,在水中不穩定,但加入增強劑后可以克服;Tb熒光壽命1.6ms,水中穩定,但其熒光波長短、散射嚴重、能量大易使組分分解,因此從測量方法學上看Tb很好,但不適合用于生物分析,故Eu最為常用。
  由于常用Eu作為熒光標記,因此增強劑就成了試劑中的重要組成。增強劑原理:利用含絡合劑、表面活性劑的溶液的親水和親脂性同時存在,使Eu在水中處于穩定狀態。現在有些試劑,在絡合Eu在抗體上時已考慮了增強問題,而使用了具有增強作用的新絡合劑,因而有的試劑沒有單獨的增強劑。
  隨著檢驗醫學的發展,對微量、超微量的測定會越來越多,同時RIA的污染問題會越來越被重視,因此,時間分辨熒光分析法(TRFIA)具有越來越大的應用空間。
 
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