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酵母活體染色

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

1)核DNA和線粒體DNA

1.當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)到約107細(xì)胞/ml時,離心(5秒)收集細(xì)胞,再懸浮在70%乙醇中。

2.固定5分鐘或5分鐘以上,用水洗2次。

3.將細(xì)胞懸浮在含有50ng/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚的封固劑中。1mg/ml的4,6-二脒基-2苯基吲哚母液可在-20℃下貯存。

4.用紫外濾片觀察。


2)線粒體

1.在生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)到約107細(xì)胞/ml時,加入100ng/ml 3,3’-二已基噁羰花青碘化物(DiOC6,Sigma D3652或Molecular Probes)用乙醇把1mg/ml母液稀釋到1/104。

2.培養(yǎng)5分鐘或5分鐘以上,用熒光素濾片觀察。


3)液泡

1.當(dāng)細(xì)胞生長到約107細(xì)胞/ml時,離心收集細(xì)胞(5秒),懸浮在含有50mmol/L檸檬酸鈉(pH4.0)的YPD中。

2.加CDCFDA(羧基-2’,7’-二氯-熒光素雙乙酸鹽)到終濃度為10μmol/L。

3.保溫10分鐘或10分鐘以上,用熒光濾片觀察。

 

4)牙痕和幾丁質(zhì)

1.用生長培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)107細(xì)胞/ml時,加100μg/ml Calcofluor(熒光發(fā)光劑28;Sigma F3543)(用水將1mg/ml母液稀釋到1/10,母液可在-20℃下黑暗保存數(shù)星期)。

2.培養(yǎng)5分鐘或5分鐘以上,用水洗2次,用紫外濾片觀察。

 
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