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人體間期細胞X—小體的制備

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-08

一、原理
1949年Barr等發現,在雌性體細胞中的兩條X染色體有一條(或這條的大部分)處于凝集不活動狀態,從而形成X-小體(或稱X-染色質、性染色質、Barr小體)。進而發現,所有哺乳類雌體細胞中都有一條這種表現的X染色體,當在個用雌或雄體中,有多于2條X染色體時,在間期細胞內除一條外,其余均形成X-小體。
人類正常的男女體細胞中,22對常染色體并無區別,但其性染色體分別為XY和XX。女性的兩條X染色體中,有一條在間期呈現濃縮狀態,可由適當的染料顯示。正常女性間期細胞中X小體陽性率約為30—50%。
二、儀器、用品及試劑
光學顯微鏡,恒溫水浴箱;
牙簽、載玻片、染色缸;
Carnoy固定液(甲醇∶冰乙酸=3∶l)70%乙醇,硫堇染液;
5N HCl,0.2%甲苯胺蘭染液。
三、操作步驟
(一)方法一
l.取材、涂片:取女性口腔上皮細胞均勻涂布在潔凈載玻片上。
2.固定:涂片后立即95%乙醇中固定30分鐘(不可干燥)。氣干。
3.染色:玻片在蒸餾水中沖洗幾次后5N HCl(22℃)水解10分鐘,蒸餾水洗去多余HCl,硫堇染色30分鐘。水洗。
4.鏡檢、氣干后即可鏡檢。若背景顏色過深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再鏡檢。
(二)方法二
l.取女性口腔上皮細胞涂片。待干燥。
2.Carnoy固定液中固定15分鐘。干燥。
3.5N HCl中10分鐘。水洗。干燥。
4.0.2%甲苯胺蘭染色2—5分鐘。水洗。氣干。
5.鏡檢。
四、注意事項
l.涂片時應均勻涂成單層,取材細胞要多些。取材前應漱口。
2.鏡檢應選擇完整、核質中顆粒均勻的細胞觀察,X-小體大小約為1μm,多位于細胞核邊緣。
3.統計X-小體陽性率,計數應選300—500個細胞。
五、試劑
1.硫堇染液配方:
①4%硫堇原液:4g硫堇粉末置研缽中以50%乙醇100ml研磨溶解。過濾。
②Michaelies緩沖液:醋酸鈉9.714g,巴比妥鈉14.714g加雙蒸水至500ml。
③硫堇工作液(PH5.7):0.1N HCl 32ml
Michaelies緩沖液28 ml
4%硫堇原液400ml
2.甲苯胺蘭染液配方:
0.2g甲苯胺蘭粉末溶于100ml雙蒸水中即可。

 
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