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染色體步移(chromosome walking)

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08
在克隆基因組基因時,已知該基因在染色體上的位置但沒有該基因的序列信息,無法制備相應的探針,因此無法直接篩查文庫去克隆基因。此時,如果知道離開該基因一定距離上的DNA序列,則可用這個DNA序列作探針,通過染色體步移來逐步接近并最后達到待克隆的基因。其基本原理是用探針篩查文庫,得到陽性克隆后,將這個重組載體中的插入片段分離出來,然后用這個片段的末端部分(注意不能包含重復序列)作為新一輪篩查文庫的探針;得到新的重組載體中的插入片段,同上一個插入片段的末端部分(即探針序列)是重疊的,共有的。也就是這兩個片段是在同一條染色體上相互鄰接的。’于是,再用新得的插入片段的末端部分作為探針,再去篩查文庫。通過一系列的操作,得到的插入片段逐漸連接延伸,最后可以步移到待克隆的基因。當然,在具體操作過程中還必須設計具體的方法,如同時構建跳步文庫(jumping library)和連接文庫(1inking library)等,使插入片段朝著一個方向步移。
 
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