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外植體的滅菌

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-08

  接種用的材料表面,常常附有多種多樣的微生物,這些微生物一旦帶進(jìn)培養(yǎng)基,就會(huì)迅速滋生,使實(shí)驗(yàn)前功盡棄。因此,材料在接種前必須進(jìn)行滅菌。滅菌時(shí),既要將材料上附著的微生物殺死,同時(shí)又不能傷及材料。因此,滅菌采用何種藥劑,什么濃度,處理多長時(shí)間,均應(yīng)根據(jù)材料對(duì)藥劑的敏感情況仔細(xì)敲定。

  經(jīng)常使用的滅菌劑有次氯酸鈉、過氧化氫、漂白粉、溴水和低濃度的氯化汞等。使用這些滅菌劑,都能起到表面殺菌的作用。但氯化汞滅菌后,汞離子在材料上不易去掉,必須將材料用無菌水多清洗幾次。

  外植體的滅菌工作應(yīng)在接種室或接種箱內(nèi)無菌的條件下進(jìn)行。


花藥的滅菌

  用于組織培養(yǎng)的花藥,按小孢子發(fā)育時(shí)期要求,實(shí)際上大多沒有成熟,花藥外面有萼片、花瓣或穎片、稃片保護(hù)著,通常處于無菌狀態(tài)。所以一般只對(duì)整個(gè)花蕾或幼穗進(jìn)行滅菌。如茄(Solanum melongena L.)的花藥,滅菌時(shí)先去掉花蕾的萼片,用70%酒精擦洗花瓣,然后將整個(gè)花蕾浸泡在飽和漂白粉上清液中10分鐘,再經(jīng)無菌水清洗2~3次,即可接種。這一滅菌程序,也適用于其它植物花藥的滅菌。


果實(shí)及種子的滅菌

  滅菌前,先將果實(shí)、種子用純酒精迅速漂洗一下或?qū)⒎N子浸泡10分鐘。對(duì)于果實(shí),一般再用2%的次氯酸鈉溶液浸泡20~30分鐘甚至幾小時(shí),持續(xù)時(shí)間視種皮硬度而定。對(duì)用作胚或胚乳培養(yǎng)的種子,如種皮太硬,則在滅菌前先去掉外種皮,再用4~8%次氯酸鈉溶液浸泡8~10分鐘,用無菌水清洗后,即可剖出胚或胚乳進(jìn)行接種。


莖尖、莖段及葉片的滅菌

  滅菌方法與花藥的滅菌方法相同。對(duì)于莖葉,因?yàn)楸┞对诳罩校疑忻虼痰雀綄傥铮詼缇皯?yīng)該用自來水沖洗干凈,用吸水紙將水吸干,再用70%酒精漂洗一下。然后,根據(jù)材料的老、嫩和枝條的堅(jiān)硬程度,用2~10%次氯酸鈉溶液浸泡6~15分鐘,用無菌水沖洗3次,用無菌紙吸干后進(jìn)行接種。


根和貯藏器官的消毒

  這類材料大多埋于土中,材料上常有損傷及帶有泥土。滅菌比較困難。滅菌前,要用自來水清洗,并用毛刷或毛筆輕輕刷洗去掉污物,吸干后用70%酒精漂洗一下,再用0.1~0.2%的氯化汞滅菌5~10分鐘,或用6~8%次氯酸鈉溶液浸5~15分鐘,接著用無菌水清洗及用無菌紙吸干,然后進(jìn)行接種。

 

 

 
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