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放射免疫對(duì)流電泳

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

(一)原理
將放射性元素標(biāo)記的抗體(或抗原)與相應(yīng)的抗原(或抗體)沉淀時(shí),沉淀線通過(guò)自顯影而證實(shí)。所謂自顯影,就是通過(guò)復(fù)合物中的標(biāo)記同位素在蛻變過(guò)程中放出的射線,作用于感光材料的鹵化銀晶體而產(chǎn)生潛影,再經(jīng)過(guò)顯影把“像”顯示出來(lái)。這樣,能檢出肉眼看不見(jiàn)的沉淀線,從而提高反應(yīng)的敏感性,這種方法可應(yīng)用于凝膠中的所有反應(yīng)。
(二)材料
1.放射性同位素標(biāo)記的抗原或抗體
2.X—射線膠片或全色膠片
3.顯影液與定影液
4.其它同對(duì)流免疫電泳
(三)操作方法
1.按對(duì)流免疫電泳制備凝膠板并打孔。
2.加樣 陰極端孔內(nèi)加抗原,陽(yáng)極端孔內(nèi)加抗體。在加被檢抗體樣品時(shí),迅速加入標(biāo)記抗原(2 000~3 000cpm),并使之混合,勿使抗原吸收后再加標(biāo)記抗原,以免由于標(biāo)記原的滯面而形成假陽(yáng)性。
3.電泳 電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。
4.電泳后,平板浸在3%HCl中漂洗8h,換液2次。
5.用流水漂洗過(guò)夜。
6.干燥 室溫或鼓風(fēng)機(jī)吹干。
7.曝光 在暗室將膠片切成與平板一樣大小,然后將藥面密接凝膠面,再在膠片上壓一張玻板,用黑布包嚴(yán),皮筋扎緊,曝光時(shí)間與所用同位素及保存期有關(guān)。181I,一周內(nèi)5h~10h;1~2周內(nèi)24h;2~3周內(nèi)48h。125I,在2個(gè)月內(nèi)10h。
8.沖洗 全色膠片沖片方法,水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干,觀察結(jié)果。
(四)結(jié)果判定
在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者,判為陽(yáng)性。

 
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