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放射免疫對流電泳

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27

(一)原理
將放射性元素標記的抗體(或抗原)與相應的抗原(或抗體)沉淀時,沉淀線通過自顯影而證實。所謂自顯影,就是通過復合物中的標記同位素在蛻變過程中放出的射線,作用于感光材料的鹵化銀晶體而產生潛影,再經過顯影把“像”顯示出來。這樣,能檢出肉眼看不見的沉淀線,從而提高反應的敏感性,這種方法可應用于凝膠中的所有反應。
(二)材料
1.放射性同位素標記的抗原或抗體
2.X—射線膠片或全色膠片
3.顯影液與定影液
4.其它同對流免疫電泳
(三)操作方法
1.按對流免疫電泳制備凝膠板并打孔。
2.加樣 陰極端孔內加抗原,陽極端孔內加抗體。在加被檢抗體樣品時,迅速加入標記抗原(2 000~3 000cpm),并使之混合,勿使抗原吸收后再加標記抗原,以免由于標記原的滯面而形成假陽性。
3.電泳 電流2.6cm×7.5cm的小板用4mA。
4.電泳后,平板浸在3%HCl中漂洗8h,換液2次。
5.用流水漂洗過夜。
6.干燥 室溫或鼓風機吹干。
7.曝光 在暗室將膠片切成與平板一樣大小,然后將藥面密接凝膠面,再在膠片上壓一張玻板,用黑布包嚴,皮筋扎緊,曝光時間與所用同位素及保存期有關。181I,一周內5h~10h;1~2周內24h;2~3周內48h。125I,在2個月內10h。
8.沖洗 全色膠片沖片方法,水洗、20℃顯影10min、水洗、定影、水洗、涼干,觀察結果。
(四)結果判定
在抗原抗體孔之間形成一條清晰的黑色影像者,判為陽性。

 
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