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雜交瘤細胞的保存與復蘇

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

雜交瘤細胞的保存

當獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細胞后,必須將一部分雜交瘤細胞保存,否則在連續(xù)傳代的過程中,可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性。另外在長期的培養(yǎng)過程中,難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分。保存方法如下:

1.材料
(1) 細胞:取對數(shù)生長期的細胞。
(2) 10%二甲基亞砜保護液(二甲基亞砜能損壞濾器,而又被高壓所破壞,所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是毒品,無菌):含10%二甲基亞砜、20%滅活胎牛血清,70%RPMI—1640液。
(3) 20%FCS—1640培養(yǎng)液:含青霉素100U/ml,鏈霉素100μg/ml。
(4) 滅菌的2ml安瓶等
2.操作方法
(1) 去掉細胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液,加入10%FCS—1640液,使細胞懸浮。
(3) 1 000r/min離心10min,去上清。細胞沉淀用10%二甲基亞砜保護液制成懸液,使成1.0×107細胞/ml。
(3) 取樣,臺盼蘭染色,計數(shù)活細胞,應在95%以上。
(4) 用注射器將細胞分裝安瓶,每瓶0.5ml~1.0ml,熔封安瓶。
(5) 放4℃ 2h。
(6) 放液氮罐氣態(tài)部分(-70℃)15h。
(7) 轉(zhuǎn)入液氮部分。
雜交瘤細胞的復蘇
1.從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。
2.無菌操作打開安瓶,取出細胞懸液,轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)瓶。
3.逐滴緩慢加入20%FCS-1640培養(yǎng)液3.5ml,這個過程延續(xù)3min。
4.5%CO2飽和濕度,37℃培養(yǎng)。
5.4h后棄去培養(yǎng)液上清,加入新鮮的20%FCS-1640培養(yǎng)液。
6.繼續(xù)培養(yǎng),換液,以至形成單層。

 
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