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western blotting的一些細節-1

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27
勻漿緩沖液的問題:
蛋白質的勻漿緩沖液的一般配方都是大同小異,里面有那么多試劑,我對其中一些試劑的功能做了查尋:
PMSF:蛋白酶抑制劑
EDTA:金屬離子螯合劑
DTT:保證蛋白SH基團不被氧化
礬酸鈉:酪氨酸磷酸酶抑制劑
所以勻漿緩沖液的蛋白酶抑制劑保護劑對于保護蛋白質量是非常重要的。
蛋白勻漿以后是否還會降解?
一般認為蛋白質勻漿以后,由于蛋白質變性,所以不會容易降解。而且不會受反復凍融的影響。但實際上蛋白樣品反復凍融幾次后,蛋白量會明顯減少。所以最好不要使勻漿后的蛋白反復凍融,并且最好不要比較不同批次勻漿的蛋白樣品。
 
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