膠體金溶液是指分散相粒子直徑在l—150 nm之間的金溶膠,屬于多相不均勻體系,顏色呈桔紅色到紫紅色.膠體金作為標(biāo)記物用于免疫組織化學(xué)始于1971年,Faulk等應(yīng)用電鏡免疫膠體金染色法(IGS)觀察沙門氏菌,此后他們把膠體金與多種蛋白質(zhì)結(jié)合.1974年Romano等將膠體金標(biāo)記在第二抗體(馬抗人IgG)上,建立了間接免疫膠體金染色法。1978年geoghega發(fā)現(xiàn)了膠體金標(biāo)記物在光鏡水平的應(yīng)用。膠體金在免疫化學(xué)中的這種應(yīng)用,又被稱為免疫金.之后,許多學(xué)者進(jìn)一步證實(shí)膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì),而蛋白質(zhì)的生物活性無明顯改變.它可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多膚、抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位,也可以用于日常的免疫診斷,進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位,因而在臨床診斷及藥物檢測等方面的應(yīng)用已受到廣泛的重視.目前電鏡水平的免疫金染色(IGS),光鏡水平的免疫金銀染色(IGSS),以及肉眼水平的斑點(diǎn)免疫金染色技術(shù)日益成為科學(xué)研究和臨床診斷的有力工具.
膠體性質(zhì)膠體金顆粒大小多在1~100nm,微小金顆粒穩(wěn)定地、均勻地、呈單一分散狀態(tài)懸浮在液體中,成為膠體金溶液。膠體金因而具有膠體的多種特性,特別是對(duì)電解質(zhì)的敏感性。電解質(zhì)能破壞膠體金顆粒的外周永水化層,從而打破膠體的穩(wěn)定狀態(tài),使分散的單一金顆粒凝聚成大顆粒,而從液體中沉淀下來。某些蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)有保護(hù)膠體金、加強(qiáng)其穩(wěn)定性的作用。
呈色性微小顆粒膠體呈紅色,但不同大小的膠體呈色有一定的差別。最小的膠體金(2~5nm)是橙黃色的,中等大小的膠體金(10~20nm)是酒紅色的,較大顆粒的膠體金(30~80nm)則是紫紅色的。根據(jù)這一特點(diǎn),用肉眼觀察膠體金的顏色可粗略估計(jì)金顆粒的大小。近10多年來膠體金標(biāo)記已經(jīng)發(fā)展為一項(xiàng)重要的免疫標(biāo)記技術(shù).膠體金免疫分析在藥物檢測、生物醫(yī)學(xué)等許多領(lǐng)域的研究已經(jīng)得到發(fā)展,并越來越受到相關(guān)研究領(lǐng)域的重視.光吸收性膠體金在可見光范圍內(nèi)有一單一光吸收峰,這個(gè)光吸收峰的波長(λmax)在510~550nm范圍內(nèi),隨膠體金顆粒大小而變化,大顆粒膠體金的λmax偏向長波長,反之,小顆粒膠體金的λmax則偏于短波長,表1所列為部分膠體金的λmax。
表 四種粒徑膠體金的制備及特性
膠體金粒徑(nm)
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1%檸檬酸三鈉加入量(ml)*
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膠體金特性
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呈色
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λmax
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16
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2.00
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橙色
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518nm
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24.5
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1.50
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橙紅
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522nm
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41
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1.00
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紅色
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525nm
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71.5
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0.70
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紫色
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535nm
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