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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):禽IgA提取與純化

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

(一)材料與試劑配制

1.禽膽汁

2.飽和硫酸銨溶液

3.0.01Mol/L pH7.4PBS液

4.0.10Mol/L pH6.4PBS液(0.30Mol/L NaCl)

5. DEAE52-纖維素

(二)操作方法

1.取冷藏的膽汁3Ⅹml,緩慢滴加Ⅹml飽和硫酸銨液,邊加邊攪拌,使成25%飽和硫酸銨液。4℃放置30min。

1. 3 000r/min離心30min,去沉淀。

2. 取上清,加飽和硫酸銨液,使成35%的飽和度,4℃放置30min。

3. 3 000r/min離心30min,棄上清。

4. 取沉淀,加0.85%NaCl液溶解,加飽和硫酸銨溶液,重復步驟3和4三次。

5. 將沉淀用0.85%NaCl液溶解,裝入透析袋,以0.01Mol/L pH7.4PBS液透析。

6. 以0.01Mol/L pH7.4PBS液平衡,過DEAE52纖維柱(20×250mm)。

7. 取透析樣品4ml(﹥20mg/ml蛋白濃度)加入層析柱。以0.01Mol/L pH7.4PBS液洗脫。

8. 再用0.10Mol/L pH6.4PBS液(NaCl濃度為0.30Mol/L)洗脫,收集洗脫液。

10.濃縮洗脫蛋白液至20mg/ml,分裝,低溫冰箱保存。

 
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