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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):分泌型IgA的分離與

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-27

(一)材料與試劑

1.初乳

2.SephadexG200

3.0.10Mol/L pH6.8PB液

4.0.01Mol/L pH7.4PB液

5.DEAE52

(二)操作方法

1.取初乳20ml,10 000rpm離心10min,棄去表面脂肪層及底部的沉淀物。

2.取乳清過SephadexG200柱(柱規(guī)格為2.50cm×90cm),以0.10Mol/L pH6.8PB液洗脫,第一峰為IgA(含IgG)。

3. 收集乳液,于0.01Mol/L pH7.4PB液中透析。

4. 將透析液濃縮至5mg/ml以上。

5. 過DE52層析柱,用0.01Mol/L pH7.4PB液洗脫,洗下蛋白峰為IgG,棄去。

6. 換用0.10Mol/L pH6.8PB液或0.01Mol/L pH7.4PBS(0.10Mol/L NaCl)液洗脫,

收集洗脫液 ,即為較純的IgA液。

7. 必要時(shí),可再過一次SephadexG200柱。

8. 濃縮,鑒定


 
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