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免疫球蛋白提取 (Immunoglobulin isolation):Fab片段的制備方法

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-27

利用胃蛋白酶分解IgG,將抗體斷鏈為Fab和Fc片段。具體操作方法如下:

1.將IgG粉末100mg,溶于2ml0.10Mol/L pH4.0醋酸緩沖液。溶液稍成白濁,30℃,保溫10min。

2.取結晶胃蛋白酶1.50mg,溶于1.50ml 0.10Mol/L pH4.0醋酸緩沖液,加入上述溶液中,于30℃作用16h。

3.用0.10Mol/L pH8.0 PBS透析一夜。

4.加入硫醇使成0.10mol/L,在室溫下攪拌30min。

5.加入1Mol/L的碘乙酰胺(Indoacetamide)使成為0.10Mol/L,室溫下攪拌1h。

6.用0.01Mol/L PBS 1 000ml透析過夜,3 000r/min,離心30min,去沉淀。

7.以上清過SephadexG100(40cm×2.0cm)以0.10Mol/L PBS洗脫。

8.以每管6ml收集,約在第8管開始,Fab片段被洗脫。

9.測OD280nm,將Fab管合并,濃縮、凍干。

10.如制備F(ab)2,上述4~6步驟則可以省略。

 
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