在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 
當前位置: 首頁 » 食品專題 » 生物實驗技術 » 免疫性技術 » 正文

單克隆抗體技術:克隆化

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-28

經過抗體測定的陽性孔,可以擴大培養,進行克隆,以得到單個細胞的后代分泌單克隆抗體。克隆的時間一般說來越早越好。因為在這個時期各種雜交瘤細胞同時旺盛生長,互相爭奪營養和空間,而產生指定抗體的細胞有被淹沒和淘汰的可能。但克隆時間也不宜太早,太早細胞性狀不穩定,數量少也易丟失。

克隆化的陽性雜交瘤細胞,經過一段時期培養之后,也還會因為細胞突變或特定染色體的丟失,使部分細胞喪失產生抗體的能力,所以需要再次或多次克隆化培養。克隆化次數的多少由分泌能力強弱和抗原的免疫性強弱而決定。一般說,免疫性強的抗原克隆次數可少一些,但至少要3~5次克隆才能穩定。

克隆化的方法很多,包括有限稀釋法、顯微操作法、軟瓊脂平板法及熒光激活分離法等。


有限稀釋法

1.材料

(1)微量培養盤,盤內各孔于克隆化前一天培養小鼠腹腔細胞(即飼養細胞)每孔2萬~4萬。

(2)HT培養基

2.操作方法

(1)取出抗體陽性孔細胞,用HT培養液制成細胞懸液。并取樣進行臺盼蘭染色,計數。

(2)用HT培養液將細胞稀釋成200個/ml、40個/ml、20個/ml和的懸液。

(3)用吸管將細胞懸液分別種入微量培養盤,每孔0.05ml,細胞含量分別為10個/孔、2個/孔、1個/孔和0.5個/孔。

(4)5%CO2飽和濕度,37℃培養。

(5)每天用倒置顯微鏡觀察克隆生長情況,選擇只有一個集落生長的孔,棄掉兩個以上和沒有細胞生長的孔。

(6)克隆大量繁殖后,布滿孔底的1/3~1/2時,測培養液抗體。

(7)抗體陽性孔細胞,移到有飼養層的組織培養瓶中,并傳2~4代就可以脫離飼養細胞,建成克隆株。


軟瓊脂克隆化

借助撒在軟瓊脂上單個細胞定位生長,而達到克隆化,具體操作如下:

1.配2.5%的瓊脂糖30ml,水浴溶化后,移入45℃水浴中。

2.將117ml完全DMEM液和3ml 10倍濃度的DMEM液混合,置45℃水浴預熱。

3.將瓊脂糖與DMEM液混合,即為含0.5%瓊脂糖的完全DMEM液,并加75×108 脾細胞。

4.每塊平皿加10ml,于室溫中凝固。

5.DMEM中的細胞與DMEM—瓊脂1:1混合,將細胞瓊脂混合物2ml鋪于凝固的平板上,使其全部覆蓋。

6.放入CO2箱飽和濕度,37℃培養10天。

7.用PBS配制0.6%瓊脂糖,于沸水浴溶解后,置45℃,在保溫情況下取一試管,迅速加入0.1ml 25%羊紅血球,0.2ml豚鼠補體,2.7ml 0.6%瓊脂糖。

8.用3ml瓊脂糖—羊紅血球混合液覆蓋克隆。于37℃CO2箱孵育1h~2h。從克隆上部溶解羊紅血球的溶血范圍,可篩選抗羊紅血球Ig。


顯微鏡操作法

在直徑6cm培養皿中,加入1ml 1.0×108細胞懸液放置5%CO2飽和濕度,37℃溫箱中放置30min以上,倒置顯微鏡下,尋找那些與周圍相距甚遠的單個細胞,將毛細管口(一頭有直角彎頭毛細管,一頭連接一尺長乳膠管,用口控制液體進入)水平置放于液面上,左右微動,直到看見管口,對準細胞,吸入毛細管,將管中細胞移到預先加有2.0×104~5.0×104飼養細胞96孔板內,培養后,即可獲得單個細胞形成的克隆。


熒光激活分離法

用一種熒光激活細胞分類器(Fluorescein Activafed Cell Sorter,FACS)。其基本原理是:將細胞經熒光抗體染色后,經噴嘴形成單個細胞的線形液滴,在萊塞光激發下,熒光素發射熒光,此信號由光電倍增管接收,再結合細胞形態大小產生光散射信號,經電腦處理,產生信號并與預定的信號對比,根據細胞熒光強度及細胞大小不同,將細胞分成不同級別,在電場中發生偏離,而分別收集于不同容器中。

 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.448 second(s), 18 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 色偷偷91久久综合噜噜噜 | 久久国产精品99久久久久久老狼 | 久久精品亚洲精品国产欧美 | 色噜噜噜噜噜在线观看网站 | 一本大道一卡二卡四卡 | 天天舔天天干天天操 | 久久精品1 | 五月婷婷丁香花 | 一级毛片在线不卡直接观看 | 久久www免费人成高清 | 婷婷色在线播放 | 免费观看一区二区 | 天天想夜夜操 | 久久精品9 | 天天射天天搞 | 国产伦子一区二区三区 | 四虎免费影院4hu永久免费 | 色成人免费网站 | 亚洲jizzjizz中文在线播放 | 激情综合亚洲 | 久久国产精品夜色 | www干| 色香色香欲天天天影视综合网 | 男校霸把男校草玩出水男男 | 亚洲婷婷综合中文字幕第一页 | 中文字幕在线看视频一区二区三区 | 福利片欧美 | 黄色美女免费网站 | 久久99精品久久久久久臀蜜桃 | 亚洲综合日韩欧美一区二区三 | 好爽好深太大了再快一点 | 性欧美高清久久久久久久 | 婷婷久久五月天 | 欧美一区二区精品 | 国产精品igao在线观看樱花日本 | 丁香网五月天 | 国产亚洲一区二区在线观看 | 激情久久久久久久久久久 | 伊人草 | 免费爱爱网站 | 新午夜影院 |