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混合型玫瑰花環試驗

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-28

原理

混合型玫瑰花環的方法是既應用補體致敏的家鴿紅細胞(PRBC)作為B—細胞的標志,同時又應用綿羊紅細胞(SRBC)作為T—細胞的標志,在一張玻片上同時檢測T、B淋巴細胞。


操作方法

1.鴿翼下靜脈采血,加等量阿氏液,保存于4℃,可用2周。

2.以Hank’s液洗鴿紅細胞3次,最后配成5%PRBC懸液。

3.取5%PRBC0.25ml,加溶血素(兔抗鴿紅細胞抗體,亞凝集單位)0.25ml于37℃水浴30min。以Hank’s液洗滌3次,去上清,加Hank’s液0.25ml。

4.加1%SRBC懸液0.25ml,37℃水浴30min,Hank’s液洗滌3次,去上清,加Hank’s液0.25ml。

5.加淋巴細胞懸液0.25ml(2×106~4×106個細胞/ml),37℃水浴5min,500r/min離心3min,置4℃過夜。

6.取出迅速加入20%甲醛溶液0.5ml,混勻,于4℃放置10min后,加2滴2%美蘭液,輕輕搖勻。

7.取1滴于載玻片,加蓋玻片,置鏡下觀察。計數300個淋巴細胞。


結果判定

一個淋巴細胞吸附有3個以上的PRBC為PRBC玫瑰花細胞,即為B細胞。

一個淋巴細胞周圍吸附有3個以上SRBC為SRBC玫瑰花細胞,即為T細胞。

一個淋巴細胞周圍附有2個以上PRBC和3個以上SRBC為雙相玫瑰花細胞,即為D淋巴細胞。

既無PRBC又無SRBC附著的淋巴細胞為N淋巴細胞,即為無標記淋巴細胞。

D淋巴細胞與N淋巴細胞是極少數的。

計數300個淋巴細胞,分別計數PRBC、SRBC玫瑰花細胞和雙相玫瑰花細胞的形成率。

 
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