1．DEAE－Sephadex A－25離子交換層析法

⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3緩沖液平衡DEAE－Sephadex A－25柱。

⑵ 加樣后，用0.1mol/L NH4HCO3緩沖液洗脫12h~14h。

⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3緩沖液洗脫，流速0.15ml~0.2ml/min，收集流出液，測OD275nm。

⑷ 測SPA活性(以對(duì)流免疫電泳)，能與人及豬正常血清產(chǎn)生沉淀線的各管合并。

⑸ 濃縮或凍干保存。

2．Sphadex G100凝膠過柱法

裝柱、加樣，以0.05mol/L pH7.4 PBS洗脫，收集洗脫液，如上法測定活性和蛋白含量。

3．親和層析法

(1) 豬IgG的制備：取正常豬血清，硫酸銨提取 球蛋白，再過DEAE－纖維素－32柱，制得純化的IgG，以0.1mol/L NaHCO3液平衡，配成4mg~5mg/ml溶液。

(2) 偶聯(lián)：將固體溴化氰1.2g溶于20ml蒸餾水中，傾入容積為15ml的Sepharose－4B中，攪拌，同時(shí)滴加2mol/L NaOH使pH維持在11.0，反應(yīng)8min，用500ml預(yù)冷的0.1mol/L NaHCO3在2號(hào)砂芯漏斗上洗脫已活化的Sepharose－4B(在90Sec內(nèi)洗脫完畢)，迅速加入IgG液15ml，于4℃緩慢攪拌過夜，次日以PBS充分洗滌，至洗出液OD280nm＜0.02為止。加入30ml 1.0mol/L乙醇胺洗柱，以封閉殘余活性基團(tuán)，再以PBS洗至中性為止。

(3) PBS親和層析：將粗制SPA溶于PBS液中，加入IgG－Sepharose－4B柱，流速0.2ml/min，以PBS洗至OD280nm＜0.02為止，換用0.1mol/L pH2.3甘氨酸－鹽酸緩沖液洗脫，流速0.2ml/min，收集洗脫液，即為純化的SPA，對(duì)流電泳檢查SPA活性，收集，濃縮，保存。