在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 
當前位置: 首頁 » 食品專題 » 生物實驗技術 » 免疫性技術 » 正文

SPA的純化

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-28

1.DEAE-Sephadex A-25離子交換層析法

⑴ 用0.1mol/L NH4HCO3緩沖液平衡DEAE-Sephadex A-25柱。

⑵ 加樣后,用0.1mol/L NH4HCO3緩沖液洗脫12h~14h。

⑶ 改用0.4mol/L NH4HCO3緩沖液洗脫,流速0.15ml~0.2ml/min,收集流出液,測OD275nm。

⑷ 測SPA活性(以對流免疫電泳),能與人及豬正常血清產生沉淀線的各管合并。

⑸ 濃縮或凍干保存。

2.Sphadex G100凝膠過柱法

裝柱、加樣,以0.05mol/L pH7.4 PBS洗脫,收集洗脫液,如上法測定活性和蛋白含量。

3.親和層析法

(1) 豬IgG的制備:取正常豬血清,硫酸銨提取 球蛋白,再過DEAE-纖維素-32柱,制得純化的IgG,以0.1mol/L NaHCO3液平衡,配成4mg~5mg/ml溶液。

(2) 偶聯:將固體溴化氰1.2g溶于20ml蒸餾水中,傾入容積為15ml的Sepharose-4B中,攪拌,同時滴加2mol/L NaOH使pH維持在11.0,反應8min,用500ml預冷的0.1mol/L NaHCO3在2號砂芯漏斗上洗脫已活化的Sepharose-4B(在90Sec內洗脫完畢),迅速加入IgG液15ml,于4℃緩慢攪拌過夜,次日以PBS充分洗滌,至洗出液OD280nm<0.02為止。加入30ml 1.0mol/L乙醇胺洗柱,以封閉殘余活性基團,再以PBS洗至中性為止。

(3) PBS親和層析:將粗制SPA溶于PBS液中,加入IgG-Sepharose-4B柱,流速0.2ml/min,以PBS洗至OD280nm<0.02為止,換用0.1mol/L pH2.3甘氨酸-鹽酸緩沖液洗脫,流速0.2ml/min,收集洗脫液,即為純化的SPA,對流電泳檢查SPA活性,收集,濃縮,保存。

 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.371 second(s), 18 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 国产网站免费观看 | 妇乱子伦激情 | 成人夜夜| 四虎国产精品永久在线 | 这里只有精品视频 | 男人的网址 | 国产香蕉久久精品综合网 | 天天干天天摸天天操 | 四虎a456tncom | 可以免费观看的黄色网址 | 精品乱人伦一区二区三区 | 日韩一级视频免费观看 | 国产美女特级嫩嫩嫩bbb | jinv在线视频 | 天天做天天爱天天干 | 97av在线 | 日韩色影视| 手机在线观看你懂得 | 国产欧美日韩在线人成aaaa | 久久午夜宅男免费网站 | 狠狠插狠狠操 | 理论片免费午夜 | 九九精品在线观看 | 五月天婷婷免费观看视频在线 | 欧美激情一欧美吧 | 欧美激欧美啪啪片免费看 | 久久手机看片 | 国产精品久久久精品视频 | 亚洲免费在线观看视频 | 国产综合视频在线观看 | 怡红院网址| 国产黄色大片又色又爽 | ww欧洲ww在线视频看ww | 天天干干干干 | xx在线观看 | 亚洲国产精品国产自在在线 | 免费亚洲成人 | 国产一区二区三区在线影院 | 日韩一级精品视频在线观看 | 天天干国产 | 亚洲成a人v在线观看 |