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HPLC常見問(wèn)題

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-07

1 . HPLC 靈敏度不夠的主要原因及解決辦法
樣品量不足:解決辦法為增加樣品量
樣品未從柱子中流出:可根據(jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子
樣品與檢測(cè)器不匹配:根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長(zhǎng)或改換檢測(cè)器
檢測(cè)器衰減太多:調(diào)整衰減即可。
檢測(cè)器時(shí)間常數(shù)太大:解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)
檢測(cè)器池窗污染:解決辦法為清洗池窗。
檢測(cè)池中有氣泡:解決辦法為排氣。
記錄儀測(cè)壓范圍不當(dāng):調(diào)整電壓范圍即可。
流動(dòng)相流量不合適:調(diào)整流速即可。
檢測(cè)器與記錄儀超出校正曲線:解決辦法為檢查記錄儀與檢測(cè)器,重作校正曲線。
2 . 做 HPLC 分析時(shí),柱壓不穩(wěn)定,原因何在? 如何解決?
原因可能有: ?

泵內(nèi)有空氣,解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣,對(duì)溶劑進(jìn)行脫氣處理;
比例閥失效,更換比例閥即可。
泵密封墊損壞,更換密封墊即可。
溶劑中的氣泡,解決的辦法是對(duì)溶劑脫氣,必要時(shí)改變脫氣方法;
系統(tǒng)檢漏,找出漏點(diǎn),密封即可。
梯度洗脫,這時(shí)壓力波動(dòng)是正常的。
3 .我購(gòu)買的 HPLC 柱驗(yàn)收測(cè)試時(shí)柱壓過(guò)高,請(qǐng)問(wèn)為什么?
柱壓過(guò)高是 HPLC 柱用戶最常碰到的問(wèn)題。其原因有多方面,而且常常并不是柱子本身的問(wèn)題,您可按下面步驟檢查問(wèn)題的起因。

拆去保護(hù)柱,看柱壓是否還高,否則是保護(hù)柱的問(wèn)題,若柱壓仍高,再檢查;
把色譜柱從儀器上取下,看壓力是否下降,否則是管路堵塞,需清洗,若壓力下降,再檢查。
將柱子的進(jìn)出口反過(guò)來(lái)接在儀器上,用 10 倍柱體積的流動(dòng)相沖洗柱子, ( 此時(shí)不要連接檢測(cè)器,以防固體顆粒進(jìn)入流動(dòng)性 ) 。這時(shí),如果柱壓仍不下降,再檢查;
更換柱子入口篩板,若柱壓下降,說(shuō)明你的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì),正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高,請(qǐng)與廠商聯(lián)系。一般情況下,在進(jìn)樣器與保護(hù)柱之間接一個(gè)在線過(guò)濾器便可避免柱壓過(guò)高的問(wèn)題, SGE 提供的 Rheodyne 7315 型過(guò)濾器就是解決這一問(wèn)題的最佳選擇。
4 .液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么?
篩板堵塞或柱失效,解決辦法是反向沖洗柱子,替換篩板或更換柱子。
存在干擾峰,解決辦法為使用較長(zhǎng)柱子,改換流動(dòng)相或更換選擇性好的柱子。

 
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