在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

高效毛細管電泳(HPLC)的基本原理

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-07

高效毛細管電泳(high performance capillary electrophoresis,HPCE)是近年來發展起來的一種分離、分析技術,它是凝膠電泳技術的發展,是高效液相色譜分析的補充。該技術可分析的成分小至有機離子、大至生物大分子如蛋白質、核酸等。可用于分析多種體液樣本如血清或血漿、尿、腦脊液及唾液等,HPLC分析高效、快速、微量。
電泳遷移
不同分子所帶電荷性質、多少不同,形狀、大小各異。一定電解質及PH的緩沖液或其它溶液內,受電場作用,樣本中各組分按一定速度遷移,從而形成電泳。
電泳遷移速度(v)可用下式表示:
v=uE
其中E為電場強度(E=V/L,V為電壓,L為毛細管總長度)。u為電泳淌度。
電滲遷移
電滲遷移指在電場作用下溶液相對于帶電管壁移動的現象。特殊結構的熔合硅毛細管管壁通常在水溶液中帶負電荷,在電壓作用下溶液整體向負極移動,形成電滲流。帶電微粒在毛細管內實際移動的速度為電泳流和電滲流的矢量和。
分離分析類型
根據其分離樣本的原理設計不同主要分為以下幾種類型:①毛細管區帶電泳(capillary zone electrophoresis,CZE);②毛細管等速電泳(capillary chromatography,CITP);③毛細管膠速電動色譜(miceller electrokinetic capillary chromatography,MECC);④毛細管凝膠電泳(capillary gelelectrophoresis,CGE);⑤毛細管等電聚焦(capillary isoelectric focusing ,CIEF)。
毛細管區帶電泳(CZE)為HPCE的基本操作模式,一般采用磷酸鹽或硼酸鹽緩沖液,實驗條件包括緩沖液濃度、pH值、電壓、溫度、改性劑(乙腈、甲醇等),用于對帶電物質(藥物、蛋白質、肽類等)分離分析,對于中性物質無法實現分離。毛細管膠束電動色譜(MECC)為一種基于膠束增溶和電動遷移的新型液體色譜,在緩沖液中加入離子型表面活性劑作為膠束劑,利用溶質分子在水相和膠束相分配的差異進行分離,拓寬了CZE的應用范圍,適合于中性物質的分離,亦可區別手性化合物,可用于氨基酸、肽類、小分子物質、手性物質、藥物樣品及體液樣品的分析。毛細管等速電泳(CITP)采用先導電解質和后繼電解質,構成不連續緩沖體系,基于溶質的電泳淌度差異進行分離,常用于離子型物質(如有機酸),并因適用較大內徑的毛細管而可用于微制備,但本法空間分辨率較差。毛細管等電聚焦電泳(CIEF)用于具兼性離子的樣品(蛋白質、肽類),等電點僅差0.001可分離的物質。毛細管凝膠電泳(CGE)依據大分子物質的分子量大小進行分離,主要用于蛋白質、核苷酸片段的分離。此外,還有毛細管電色譜(CEC)及非水毛細管電泳(CNACE),用于水溶性差的物質和水中難進行反應的分析研究。目前CZE和MECC用得較多,本文以這兩種方法為例來說明HPLC的原理。
CZE的基本原理
HPLC選用的毛細管一般內徑約為50μm(20~200μm),外徑為375μm,有效長度為50cm(7~100cm)。毛細管兩端分別浸入兩分開的緩沖液中,同時兩緩沖液中分別插入連有高壓電源的電極,該電壓使得分析樣品沿毛細管遷移,當分離樣品通過檢測器時,可對樣品進行分析處理。HPLC進樣一般采用電動力學進樣(低電壓)或流體力學進樣(壓力或抽吸)兩種方式。在毛細管電泳系統中,帶電溶質在電場作用下發生定向遷移,其表觀遷移速度是溶質遷移速度與溶液電滲流速度的矢量和。所謂電滲是指在高電壓作用下,雙電層中的水合陰離子引起流體整體地朝負極方向移動的現象;電泳是指在電解質溶液中,帶電粒子在電場作用下,以不同的速度向其所帶電荷相反方向遷移的現象。溶質的遷移速度由其所帶電荷數和分子量大小決定,另外還受緩沖液的組成、性質、pH值等多種因素影響。帶正電荷的組份沿毛細管壁形成有機雙層向負極移動,帶負電荷的組分被分配至毛細管近中區域,在電場作用下向正極移動。與此同時,緩沖液的電滲流向負極移動,其作用超過電泳,最終導致帶正電荷、中性電荷、負電荷的組份依次通過檢測器。
MECC的基本原理
MECC是在CZE基礎上使用表面活性劑來充當膠束相,以膠束增溶作為分配原理,溶質在水相、膠束相中的分配系數不同,在電場作用下,毛細管中溶液的電滲流和膠束的電泳,使膠束和水相有不同的遷移速度,同時待分離物質在水相和膠束相中被多次分配,在電滲流和這種分配過程的雙重作用下得以分離。MECC是電泳技術與色譜法的結合,適合同時分離分析中性和帶電的樣品分子。

 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.415 second(s), 63 queries, Memory 1.01 M
主站蜘蛛池模板: 丁香花在线观看免费观看 | 日韩一级欧美一级一级国产 | 久操视频在线播放 | 色综合久久中文字幕网 | 天天爱夜夜做 | 天天操夜夜操狠狠操 | 日本一区二区三区在线观看视频 | 日本成人视屏 | 欧美成人天天综合天天在线 | 成熟妇女毛耸耸性视频 | 国产精品一一在线观看 | 思思99re66在线精品免费观看 | 香蕉免费在线视频 | 亚1州区2区三区4区产品 | avbobo在线观看 | 四虎影视亚洲精品 | 一级aaa毛片 | 夜夜爽66 | 一级特级毛片免费 | 国产亚洲精品仙踪林在线播放 | 免费看吻胸亲嘴激烈网站 | 亚洲成在人色婷婷 | 天天射天天射天天干 | www天堂在线 | 免费一区二区视频 | 在线视频人人视频www | 乱人伦的小说 | 777色狠狠一区二区三区香蕉 | aaa在线 | 夜夜爽网站 | 五月天婷婷丁香花 | 手机在线观看免费视频 | 色噜噜噜噜色 | 夜夜操狠狠干 | 福利视频999 | 天堂网一区 | 日本口工禁漫画无遮挡全彩 | 兔费看全黄三级 | 色免费视频 | 婷婷色网站 | 成在线人永久免费播放视频 |