在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

定量PCR技術

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-06-28

定量PCR(Polymerase Chain Reaction)技術有廣義概念和狹義概念。廣義概念的定量PCR技術是指以外參或內參為標準,通過對PCR終產物的分析或PCR過程的監測,進行PCR起始模板量的定量。
??廣義概念下的定量PCR技術可以分為五種類型:
(1)外參法 終產物分析。所謂“外參法”是指樣本與陽性參照在兩個反應容器內反應。這種類型沒有對樣本進行質控監測,易出現假陰假陽結果,沒有監測擴增效率,定量不準。
(2)內參法 終產物分析。所謂“內參法”是指樣本與陽性參照在一個反應容器內反應。這種類型對樣本進行質控監測,排除假陰結果,但是定量不準。

(3)外標法 過程監測。這種類型監測擴增效率,陽性樣本定量準,但是無法排除假陰結果。

(4)內參法 過程監測。由于樣本與陽性參照在一個容器內反應,用同樣的Taq酶和反應參與物,存在竟爭性抑制,起始模板量濃度高的反應會抑制起始模板量濃度低的反應,所以定量不準。

(5)外標法 過程監測 內對照。這種類型監測擴增效率,陽性樣本定量準,同時排除假陰結果。這種類型是應該提倡的。PCR過程的監測有多種檢測模式。最常用的有三種檢測模式:

(1)R Green I 檢測模式。溫度循環為94—55—72°C三步法,只有引物,無探針,熒光染料鑲嵌在雙股螺旋鏈中間。通過對特定方向的強熒光檢測獲得信號,這種試劑檢測模式易產生非特異信號,且本底光較大。

(2)解探針模式(Taqman)Hydrolysis Probe 。溫度循環為94—60°C二步法,不僅有引物,還有另外一個特異針對擴增模板的探針在引物對之間。在探針相鄰兩個堿基上分別結合兩個熒光染料,一個染料接受激發光得到的能量傳給了第二個染料,接受能量的第二個染料通過發射特征光子回到穩定態。當Taq酶在60°C延伸擴增鏈時,遇到探針,利用Taq酶5`—3`外切酶活性將探針水解成單個堿基,單個堿基之間距離較遠,第一個染料的能量無法傳給第二個染料,只好通過發射特征光子回到穩定態,通過對溶液中第一個染料的熒光檢測獲得信號。這種試劑檢測模式增加了檢測信號的特異性,但是由于利用了Taq酶5`—3`外切酶活性,一般試劑廠家只給Taq酶的聚合酶活性定標,沒有同時給Taq酶5`—3`外切酶活性定標,不同批號試劑之間會給定量帶來差異。另外對探針的熔點溫度(Tm)僅要求其高于60°C,這就使不同試劑盒之間的特異性參差不齊,而且無法做質控檢測。

(3)雜交探針(Hybridization Probes)模式。溫度循環為94—55—72°C三步法,有引物,二個特異針對擴增模板相鄰的探針在引物對之間,在一個探針3`堿基上結合一個熒光染料,在另一個探針5`堿基上結合第二個熒光染料。在55°C時,兩個探針都剛好接合在模板上,第一個染料接受激發光得到的能量傳給了第二個染料,接受能量的第二個染料通過發射特征光子回到穩定態,通過對結合在擴增模板上雙探針中第二個染料的熒光檢測獲得信號。這種試劑檢測模式中熒光信號與特定雜交溫度相關,探針的濃度始終保持不變,因此可以在擴增后檢測熔解曲線作為信號的特異性質控。另外這種試劑檢測模式可以用于點突變檢測。
??狹義概念的定量PCR技術(嚴格意義的定量PCR技術)是指用外標法(熒光雜交探針保證特異性)通過監測PCR過程(監測擴增效率)達到精確定量起始模板數的目的,同時以內對照有效排除假陰性結果(擴增效率為零)。在國家沒有出臺陰陽判定標準時,所用PCR系統靈敏度最好達到一個拷貝(一個病毒)。從理論上說,只要有一個拷貝數,樣本就算陽性;一個拷貝數都沒有才算陰性。

 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.245 second(s), 453 queries, Memory 1.91 M
主站蜘蛛池模板: 精品免费| 日本不卡视频在线| 午夜黄色| 亚洲人成一区| 最好看免费中文字幕2018视频| 亚洲婷婷综合网| 色老头在线官方网站| 久久综合97色综合网| 成 人色 网 站999| 天堂中文最新版www| vip免费观看| 欧美成人亚洲| 天堂bt在线网bt| 久久国产精品久久久久久| www.91久久| 美女被免费视频的网站| 1314酒色网| 新激情五月| 久久国产精品99精品国产987| 夜夜夜精品视频免费| 黄视频日本| 日本在线不卡免费| 色多多在线| 高清国产在线| 久久成人福利视频| 亚洲区在线播放| 色偷偷亚洲| 国产激烈床戏无遮挡在线观看| 欧美又粗又长又湿又黄的视频| 1024你懂的在线播放欧日韩| 黄色插插插| 欧美激情综合| 夜夜春夜夜夜夜猛噜噜噜噜噜| 福利视频免费观看| 高h 男男| 久久精品视频5| 天天骑天天干| 亚洲一区二区三区中文字幕 | 日本三级11k影院在线| 亚洲人成电影在在线观看网色| 激情网五月天|