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蛋白質(zhì)序列測定

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28
序列測定(sequencing)已有50多年的歷史,但開始時進(jìn)展十分緩慢。最初,人們致力于建立蛋白質(zhì)(proteins)和多肽(peptides)的分離技術(shù),并確定其氨基酸(amino acids)種類及含量。1945以前,沒有任何蛋白質(zhì)序列定量測定的方法。以后十年中,隨著色譜技術(shù)和標(biāo)記方法的快速進(jìn)展,第一個多肽激素(胰島素)的全序列測定于1955年完成(Ryle等,1955)。五年后,第一個酶(核糖核酸酶)序列測定完成(Hirs等,1960年)。1965年,約有20個含100多個殘基的蛋白質(zhì)序列被確定。截止1980年,這一數(shù)字已達(dá)1500個。而今天,已測定的蛋白質(zhì)序列已達(dá)30萬個,這在50年前是難以想象的。
最初,蛋白質(zhì)序列測定主要采用手工的埃德曼降解和環(huán)甲基化(Edman deglation - dansylation)方法(Edman,1950年)。蛋白質(zhì)序列測定的快速進(jìn)展,應(yīng)該歸功于自動測序儀的研制成功。與埃德曼和貝格(Begg) 于1967年發(fā)明的測序法相比,1980年開始使用的自動測序儀的靈敏度提高了近1萬倍。
質(zhì)譜技術(shù)的發(fā)展為蛋白質(zhì)序列測定開辟了新的途徑。第一次用這種方法測定完整的蛋白質(zhì)分子是在1997年。質(zhì)譜法測序的突出優(yōu)點是可以識別翻譯后修飾 (post-translations modification) 而得到的特殊氨基酸。用其它方法進(jìn)行蛋白質(zhì)序列測定時,這種修飾信息無法獲得。正是利用了質(zhì)譜技術(shù),人們得出了 g-氨基丁酸處于凝血素N-末端的重要結(jié)論。
 
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