1989年,Horton等人提出了SOE法(Gene splicing by over lap extension),即通 過復制時DNA鏈的交錯延伸不實現基因拼接,分四步進行。
(1)引物設計:引物a和d是常規引物;b的左半段為常規引物,右半段為基因Ⅱ的引 物序列;c同理;則b和c的部分堿基可互補配對。
(2)基因I、Ⅱ分別擴增,產物相應為片段A、B和C、D。
(3)兩種產物混合,經變性及退火處理,A鏈和D鏈部分堿基互補配對,成雜交鏈。
(4)在DNApolymeraseI作用下,A和D鏈互為引物和模板,合成出A'D'鏈,即為基因I 和基因Ⅱ的接接產物。若在引物中引入突變的堿基序列,則在接接產物中,將按預先 設計要求出現定點突變。