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基因拼接SOE法

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01

  1989年,Horton等人提出了SOE法(Gene splicing by over lap extension),即通 過復制時DNA鏈的交錯延伸不實現(xiàn)基因拼接,分四步進行。
 。1)引物設計:引物a和d是常規(guī)引物;b的左半段為常規(guī)引物,右半段為基因Ⅱ的引 物序列;c同理;則b和c的部分堿基可互補配對。
 。2)基因I、Ⅱ分別擴增,產(chǎn)物相應為片段A、B和C、D。
 。3)兩種產(chǎn)物混合,經(jīng)變性及退火處理,A鏈和D鏈部分堿基互補配對,成雜交鏈。
  (4)在DNApolymeraseI作用下,A和D鏈互為引物和模板,合成出A'D'鏈,即為基因I 和基因Ⅱ的接接產(chǎn)物。若在引物中引入突變的堿基序列,則在接接產(chǎn)物中,將按預先 設計要求出現(xiàn)定點突變。

 

 
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