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聚丙烯酰胺凝膠電泳protocal

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-07-01
根據(jù)分離DNA片段的大小及需凝膠的容積,配制聚丙烯酰胺凝膠.
  1.按要求裝配好垂直電泳板,兩塊玻璃板的兩側(cè)及底部用1%的瓊脂 糖封邊,防止封閉不嚴(yán)而使聚丙烯酰胺液漏出.
  2.將裝好的玻璃電泳板傾斜成45~60℃角.
  3.按表3配制所需%濃度凝膠的毫升數(shù).
  4.加入TEMED后,立即混勻,緩緩倒入兩玻璃板間的膠床中,直到液 體接近溢出時為止.
  5.立即插入適當(dāng)?shù)氖嶙樱芮凶⒁夥乐故猃X下產(chǎn)生氣泡,用一有力 的夾將梳子夾在一邊的玻璃板上,然后將玻璃板斜靠在物體上,使 成10°角,可減少液體泄漏的機(jī)會.
  6.室溫聚合一小時后,將玻璃板插入電泳槽中,上緊,倒入0.1XTBE 緩沖液.
  7.小心取出梳子,立即用緩沖液沖洗加樣孔,因?yàn)槭嶙尤〕龊螅?子上吸附的及凝膠頂部未聚合的丙烯酰胺會流入加樣孔內(nèi)聚合,產(chǎn) 生不規(guī)則的表面,將導(dǎo)致以后DNA電泳帶型不規(guī)則.
  8.將DNA樣品與適量的載樣緩沖液混勻后,加到樣品孔內(nèi),加樣時不 要產(chǎn)生氣泡.
  9.接好電極,電壓為1-8V/cm,進(jìn)行電泳.
  10.根據(jù)指示劑遷移位置來判定是否終止電泳.
  11.電泳畢,切斷電源,棄去電泳儀,取出膠床板,小心移去一塊玻 璃板,讓凝膠吸附在另一塊玻璃板上.浸入含0.5ug/ml的溴化乙錠溶 液中,15~30min后取出水洗紫外儀下觀察結(jié)果.
  12.聚丙烯酰胺凝膠電泳只能檢出>10ng以上量的DNA條帶.要求更高 的靈敏度,可用銀染.
 
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