在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| | 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

玻片PCR

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01
在聚丙烯管中可以對多種含膜板材料進行PCR,而在顯微玻片上用組織細胞涂片或切片直接進行DNA擴增的方法就稱為玻片PCR(Slide-PCR)。
  先將細胞涂片或呈單層細胞,然后用甲醇/醋酸(3:1,V/V)、Carnoy溶液、無水乙醇或4%多聚甲醛溶液固定5~15min。用蒸餾水沖洗,干燥,直接使用或保存于-20℃備用。在玻片上劃20mm×28mm為免疫組化反應區。加入30μl PCR反應混合液,其中含10mmol/L Tris pH8.3,50mmol/L KCl,1.5mmol/L MgCl2,200μmol/l dNTPs,100nmol/L引物,0.01%(V/V)明膠,0.2% BSA, 2.5u/100μl Taq酶。然后蓋上22mm×40mm的蓋玻片,邊緣用石蠟油封好。把玻片放入PCR熱循環儀金屬塊上,使金屬塊與樣品呈最大程度接觸,同在聚丙烯管中一樣,進行30~40個循環。對于較短的擴增片段在后期循環中變性溫度可降低。反應后,將致冷玻片放在氯仿中除去大部分石蠟油,但不取出蓋玻片,用一個尖鑷子輕輕拈起蓋玻片一角,在相對的一角中PCR反應混合液呈半月形液面,用移液器回收。一般可回收25μl混合液,將反應產物進行瓊脂糖電泳或用套式PCR引物按標準PCR進行重新擴增。片上擴增物可做原位雜交顯示。
  在Slide-PCR中,需0.1%~1%的BSA。加入BSA可以保證擴增結果,但效率不一定很高。明膠(至少0.0001%),對擴增1kb左右的靶DNA十分重要。但對小片段擴增結果影響不大。不同的樣品提取方法或固定法對Slide-PCR都可行。
  Silde-PCR的機理可能是在起始變性過程中一部分DNA從細胞中洗提出來,然后在細胞和玻片的水相中進行PCR。用地高辛標記的人全基因組DNA探針雜交表明在起始循環中DNA極微量,而30個循環后很豐富。常規細胞染色表明只有少量的形態改變。
  Silde-PCR對于玻片上的細胞樣品提供了一種較好的方法,而不必再把這些樣品從玻片上括下來,使操作簡便,污染減少。本方法對于原樣品量極微且需病史追蹤保存的(如子宮頸涂片或涂片)具有實用價值。
 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.469 second(s), 858 queries, Memory 2.69 M
主站蜘蛛池模板: 午夜精品久久久久 | 手机精品视频在线观看免费 | 久久中文字幕一区二区 | 国模私拍大尺度视频在线播放 | 亚洲精品国产自在久久出水 | 精品一区二区三区自拍图片区 | 在线亚洲欧美性天天影院 | 久久88色综合色鬼 | 国产又大又黄又粗又爽 | 天天草天天干 | 午夜在线视频观看版 | 日韩欧美中文在线 | 婷婷在线五月 | 看全色黄大色大片免费久久怂 | 日本黄色绿像 | 成人三级在线播放线观看 | 欧美三级色图 | 一级日本高清视频免费观看 | 色偷偷91综合久久噜噜 | 新版天堂资源中文8在线 | 欧美生活性色 | 欧美在线资源 | 一二三区在线视频 | 狠狠干狠狠鲁 | 五月天婷婷在线视频 | 日本色频| 免费任我爽橹视频在线观看 | 婷婷六月激情 | 天天干天天操天天插 | 免费在线黄网 | 激情四月婷婷 | 亚洲午夜日韩高清一区 | 快乐你懂的在线视频免费观看 | 亚洲综合色网站 | 久久这里只有精品免费视频 | 国产成人经典三级在线观看 | 三级色图| 免费人成网站在线高清 | 人人舔| 国产亚洲精品成人一区看片 | 日本一区二区三区四区在线观看 |