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生物發光共振能量轉移(Bioluminescence Resonance Energy Trans

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01
最近,人們把注意力集中到了活細胞的共振能量轉移(RETresonance energy transfer)技術上。利用這種方法可以非侵入性地監測特異蛋白質-蛋白質之間的相互作用。這些技術是建立在能量轉移的基礎上,在一個發光或熒光供體和一個熒光受體(如綠色熒光蛋白的突變體GFP)之間會發生能量轉移。例如,在一些海洋生物(如水母Aequorea victoria和海參R. reniformis)中自然發生一種能量轉移現象――生物發光共振能量轉移。在這個過程中,Renilla的熒光素酶(Rluc)在有底物腔腸素的存在下能夠發出藍光(480nm),能夠轉移能量到GFP的突變體上[增強的黃色熒光蛋白(EYFP)], 隨之后者發出530nm的綠光。這兩個蛋白的相互作用可以通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者的相互關系來進行評估。它們間的能量轉移只有在RlucEYFP的兩個融合蛋白接近到足夠近(<100 A°)的距離時才能發生。BRET的信號可以通過比較EYFP發出的綠光和Rluc發出的藍光的量來進行測量。因為BRET信號是一個比率數,不是一個絕對量,它消除了那些因為由于細胞數、細胞類型和其它實驗變量而引起的數據變量。

2. 生物發光共振能量轉移(BRET)監測蛋白-蛋白互作。

這個方法已成功地應用于活細胞中受體二聚體形成(如胰島素受體)和受體間相互作用等研究中。BRET也是一種靈敏地檢測方法,可以應用于活細胞內轉錄激活核蛋白相互作用等研究中。

雖然BRETFRET特別適合于高通量篩選,被使用于藥物開發中,但是此技術目前因為關系到供體和受體間的距離障礙,所以還是有一些缺點。

向微型化分析的方向發展

小型化分析設備,如微矩陣和微流裝置,已經得到充分的發展,同時不同的,基于傳統的小規模分析的方法也得到進一步發展,如微孔板。

 

 
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