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siRNA表達框架

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01

siRNA表達框架(siRNA expression cassettes,SECs)是一種由PCR得到的siRNA表達模版,能夠直接導入細胞進行表達而無需事前克隆到載體中。這個方法最早是由Castanotto和其同事采用,包括一個RNA polⅢ啟動子,一段發夾結構siRNA,一個RNA pol III終止位點。與siRNA表達載體不同的是,SECs不需要載體克隆和測序等頗為費時的步驟,可以直接由PCR得到,耗時不到一天。因此,SECs成為篩選siRNA的最有效工具之一,甚至可以用來篩選在特定的研究體系中啟動子和siRNA的最適搭配。如果在PCR兩端添加酶切位點,那么通過SECs篩選出的最有效的siRNA后,可以直接克隆到載體中構建siRNA表達載體。構建好的載體可以用于穩定表達siRNA和長效抑制的研究。

該方法的主要缺點是PCR產物很難轉染到細胞中。如果有適合的新型轉染試劑能提高SEC的轉染效率該問題就可以解決了。另外,沒有克隆到載體中的PCR片斷并不適于大規模制備。

最適用于:篩選siRNA序列,在克隆到載體前篩選最佳啟動子
不適用于:長期抑制研究。(如果克隆到載體后就可以了)

 

 

 
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