在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

VIP標識 上網做生意,首選VIP會員| 設為首頁| 加入桌面| 收藏本頁| 手機版| RSS訂閱
食品伙伴網服務號
 

siRNA表達載體

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01

多數的siRNA表達載體依賴RNA聚合酶III 啟動子(pol III)中的一種,操縱一段45—50nt的發夾結構RNA(small hairpin RNA, shRNA)在哺乳動物細胞中的表達,shRNA在細胞內會自動被加工成為siRNA,從而引發基因沉默或者表達抑制。這一類啟動子包括大家熟悉的人源和鼠源的U6啟動子和人H1啟動子等。采用RNA pol III啟動子的原因是由于它有明確的啟始和終止序列,總是在離啟動子一個固定距離的位置開始轉錄合成RNA,遇到4—5個連續的U即終止,并且轉錄產物在第二個尿嘧啶處被切下來,非常精確,而且還可以在哺乳動物細胞中表達更多的小分子RNA。轉錄出的RNA形成發卡樣結構后,會在3’端形成2個突出的尿嘧啶,這類似于天然的siRNA,因而有利于雙鏈RNA誘發RNAi。要使用這類載體,需要訂購2段編碼短發夾RNA序列的DNA單鏈,退火后克隆到相應載體的pol III 啟動子下游。克隆的過程需要幾天的時間,也需要經過測序以保證克隆的序列是正確的。

先在體外構建能表達雙鏈RNA的載體,再將載體轉移到細胞內在細胞內合成出雙鏈RNA,不但能增加有效轉染細胞的種類,而且在長期穩定表達載體的細胞株中,雙鏈RNA能夠長期發揮阻斷基因的作用。

現在有多個報道說通過質粒表達siRNAs同樣可以抑制特定基因的表達。當這種帶有PolIII 啟動子和shRNA編碼序列的質粒轉染哺乳動物細胞時,這種能表達siRNA的質粒確實能夠下調特定基因的表達,抑制范圍包括外源基因和內源基因。

腺病毒是體內轉基因的常用載體。Xia HaiBin等用腺病毒做載體,在體內和體外表達dsRNA,并成功的阻斷了基因的表達,從而實現了成體動物的基因敲除。

最近多個廠家開始研究逆轉錄病毒和其他病毒載體用于siRNA表達,其優勢在于可以直接高效率感染細胞進行基因沉默的研究,避免由于質粒轉染效率低而帶來的種種不便。

主要優點:

1.是唯一可以進行長期研究的方法。雙鏈RNA只能短暫抑制哺乳動物細胞的基因表達,而具有發卡結構的雙鏈RNA能夠增加阻斷基因表達的時間。在小鼠畸胎瘤細胞,胚胎干細胞,C2C12細胞中,用長鏈具有發卡結構的雙鏈RNA有效的阻斷了報告基因的表達,在穩定表達具有發卡結構的雙鏈RNA的細胞株中,報告基因的表達被長期的阻斷了。帶有抗生素標記的載體可以在細胞中持續抑制靶基因的表達,持續數星期甚至更久。即使是對轉染帶有篩選標記質粒的細胞進行瞬時篩選,也有助于富集帶質粒的細胞。這也可以幫助解決一些難轉染的細胞由于轉染效率低造成的問題。

2.由于質粒可以復制擴增,相比起化學合成來說,能夠顯著降低制備siRNA的成本。

適用:已知一個有效的siRNA序列,需要維持較長時間的基因沉默,或者需要用抗生素篩選能表達siRNA的細胞。長期研究。
不適用:篩選siRNA序列(其實主要是指需要多個克隆和測序等較為費時、繁瑣的工作)。

 
[ 網刊訂閱 ]  [ 食品專題搜索 ]  [ 加入收藏 ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
鏇村

 

 
推薦圖文
推薦食品專題
點擊排行
 
 
Processed in 0.290 second(s), 19 queries, Memory 0.88 M
51La
主站蜘蛛池模板: 四虎国产成人亚洲精品 | 亚洲乱码尤物193yw在线播放 | 国产人成午夜免费噼啪视频 | 色偷偷综合 | 久久综合影视 | 日韩艹| 夜夜欢视频 | 在线成人欧美 | 午夜色片 | 天天草b| 亚洲天堂视频在线播放 | 狠狠色噜噜狠狠狠97影音先锋 | 国产精品bdsm在线调教 | 色老板在线视频一区二区 | 色视频在线播放 | 蜜色网 | 91精品国产色综合久久不卡蜜 | 精品久久香蕉国产线看观看亚洲 | 好爽好黄的视频 | 六月丁香中文字幕 | 色狠狠成人综合网 | 日本69xxxxx| 欧色美 | 国产色爽女小说免费看 | 娇妻被黑人蹂躏 | 精品国产成人系列 | 午夜想想爱午夜剧场 | 亚洲欧美人成网站综合在线 | 天天插一插 | 香蕉视频黄色在线观看 | 国产免费小视频 | 国产性做久久久久久 | 色中文字幕在线 | 高清视频 一区二区三区四区 | 成人午夜性视频欧美成人 | caobi在线观看| 色性综合 | 日本五十交尾在线观看 | 欧美极品xxxxⅹ另类 | 欧美51| 天堂视频在线观看 |