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siRNAs制備的方法

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-01

目前為止較為常用的5種制備siRNAs的方法包括:

1.化學合成

2.體外轉錄

3.長片斷dsRNAs經RNase III 類降解

4.siRNA表達載體或者病毒載體在細胞中表達siRNAs

5.PCR制備的siRNA表達框在細胞中表達

前三種方法經過體外制備siRNAs然后應用專門的RNA轉染試劑將siRNAs轉到細胞內轉染或者電轉染導入哺乳動物細胞;后兩種方法則這兩種方法的優點在于不需要直接操作RNA,依賴能夠表達siRNAs的DNA載體或者基于PCR的表達框架轉染到細胞中,通過轉染到細胞的DNA模板在體內的轉錄得到siRNAs。每種方法都有自己的優點和缺點。哪種是最好的方法,其實取決于實驗目的。

比較項目

體外制備siRNA

體內表達siRNA

化學合成

體外轉錄

RNase III降解dsRNA

SiRNA

表達載體

PCR

表達框

設計和篩選最有效siRNA序列

需要

不需要

需要

材料需求

21ntsiRNA

29nt siDNA

轉錄模版 (200-1000bp)

45-50nt dsDNA

~50nt dsDNA

制備規模

大量

受限

大量

受限

合成/制備 轉染

所需時間

4-2

dsDNA合成時間 1

轉錄模版制備時間 1

dsDNA合成時間 5天以上

dsDNA合成時間 6小時

個人所需操作時間

幾乎沒有

(只需定購)

中等

中等

標記siRNA

進行細胞定位

不能

轉染的難易程度

專門的RNA轉染試劑或者電轉染

DNA轉染,不直接操作RNA

檢測總體轉染效率

不能

不能

抑制時效(即穩定性)

短暫

長期

短暫

制備費用

相對較低

中等

 
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