1 能量傳遞法:Heller等設(shè)計用兩個緊接的探針,一個探針的一端用化學(xué)發(fā)光基團(供體)標記,另一個探針的一端用熒光物質(zhì)標記,并且這兩個探針靠得很近。兩個靠得很近的探針用不同的物質(zhì)標記(標記光發(fā)射),當探針與特異的靶雜交后,這些標記物靠得很近。一種標記物發(fā)射的光被另一種標記物吸收,并重新發(fā)出不同波長的光,調(diào)節(jié) 檢測器使自動記錄第二次發(fā)射光的波長。只有在兩個探針分子靠得近時,才能產(chǎn)生受激發(fā)光,因此這種方法具有較好的特異性。
2 吖啶翁酯標記法:吖啶翁酯標記探針與靶核酸雜交后,未雜交的標記探針分子上的吖啶翁酯可以用專門的方法選擇性除去,所以雜交探針的化學(xué)發(fā)光是與靶核酸的量成比例的。該法的缺點是檢測的敏感度低(約1ng的靶核酸),僅適用于檢測擴增的靶序列,如rRNA或PCR擴增產(chǎn)物。
2 吖啶翁酯標記法:吖啶翁酯標記探針與靶核酸雜交后,未雜交的標記探針分子上的吖啶翁酯可以用專門的方法選擇性除去,所以雜交探針的化學(xué)發(fā)光是與靶核酸的量成比例的。該法的缺點是檢測的敏感度低(約1ng的靶核酸),僅適用于檢測擴增的靶序列,如rRNA或PCR擴增產(chǎn)物。