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酰化試劑(Bolton和Hunter試劑)法

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-06

  1.原理 用酰化劑3--(4-羥苯基)丙酸—N琥珀酰胺酯(Bolton—Hunter試劑)做連接試劑,將125I標記在羥苯基的2,5位置上,再將琥珀酰胺酯水解,通過一個酰氨鍵將3--(4—羥基—5—125I—苯基)接在蛋白或多肽的末端氨基上。

  2.方法 125I—Bolton—Hunter試劑可用氯胺T法自行制備,出已有該試劑的苯溶液作為商品出售。使用時取一定量的標記酯(μmol 蛋白用3~5μmol標記酯),用氮氣吹除苯,投入欲標記蛋白5~10μg及緩沖液10~50μl,pH8.0~8.5為宜,在冰浴中反應15~30min后,加入多量氨基酸(如甘氨酸),使過量標記酯消耗掉以終止反應。

  此法避免了蛋白質與氧化劑的接觸,又避免了與放射性碘原子的直接接觸,可防止碘源中有害物質對蛋白質的損傷,適用于標記缺乏酪氨酸的蛋白質或酪氨酸在活性中心,引入碘原子后會引起蛋白質的失活。其缺點是標記技術比較復雜,需要接觸較多的放射性,經二步反應,碘標記率比較低。一般認為此法不宜標記短肽,而適于分子量大于1萬的蛋白質。


 
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