此法抽提的酵母蛋白適用于SDS凝膠電泳和Western印跡分析。

1．從OD600＝2的細(xì)胞培養(yǎng)物中抽提酵母蛋白質(zhì)。培養(yǎng)物的一種簡單制備方法是將細(xì)胞接種到5ml YPD中，過夜培養(yǎng)后獲得指數(shù)培養(yǎng)物（OD600＝0.5～2.0）。

2．在水浴上把OD600＝2的細(xì)胞培養(yǎng)物轉(zhuǎn)到含有2ml的50mmol/L Tris-HCl(pH7.5)、10mmol/L疊氮化鈉溶液的13mm離心管中，用吊籃式醫(yī)用離心機(jī)離心沉淀細(xì)胞。

3．用25號針頭吸出上清液，再用30μl ESB緩沖液懸浮細(xì)胞。

4．快速轉(zhuǎn)入微型離心管，在100℃下保溫3分鐘，使蛋白酶失活之后，樣品存放于－20℃。

5．加入0.1g的0.2mm的玻珠，或裝入玻珠直至液體剛好浸沒，劇烈振蕩混合2分鐘。

6．加入70μl ESB緩沖液，稍加振蕩，置100℃保溫1分鐘。

ESB緩沖液（可在4℃貯存數(shù)天）：

2％ SDS

80 mmol/L Tris-HCl (pH 6.8)

10% 甘油

1.5％ 二硫基蘇糖醇（DTT）

0.1mg/ml 溴酚藍(lán)

7．取5～20μl抽提液上樣進(jìn)行SDS凝膠電泳。