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常用的熱循環儀

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-07-06

對PCR產物進行實時定量的測定之所以能成為現實,并且應用如此廣泛,其中一個重要的原因就是新的熱循環儀的研制與推廣。目前,國內外常用的熱循環儀主要有以下幾種:

1. PE公司生產的Applied Biosystem系列:

(1) ABI Prism 7700 Sequence Detection System (SDS)是第一種作為商業用途的實時PCR測定儀,它由激光激發熒光,并且可在500-660nm范圍內調節波長,可以用于基于水解探針、雙鏈DNA結合染料、分子beacon原理的分析。一次可以測定96個樣本,并且速度較快,一批樣本的完成只耍要2小時。但是它不能實時對擴增結果進行分析,而只能在全部擴增結束后才進行數據分析。

(2) Gene Amp 5700 SDS: 它的基本工作原理和操作與 ABI Prism 7700 SDS相同,但是它是利用鹵素燈為激發光源,而且只設計了一個檢測波長。

(3) ABI Prism 7900 SDS: 這是一種為實現高通量檢測而設計的儀器,其基本構成與ABI Prism 7700 SDS相同,但程序設計完全實現自動化要求,而且有兩種樣品盤可供選擇(96孔和384孔)。如果加上一個裝載輔件,可以在24h之內完成84個384孔板的樣本測定。


2. Roche 公司生產的Lightcycler熱循環儀,它以能裝載20-25ul的毛細硅管作為反應管進行擴增,光源選用冷光源系統,可以減少光源對樣本的影響。由二極管發射藍光激發熒光,并提供三個濾光片,可利用熒光分光測定的原理,同時對一個反應體系的多種熒光進行檢測,所以它完全可以進行多重PCR。由于Lightcycler使用了其獨特毛細管反應體系和空氣快速熱循環系統,使樣本能在非常短的時間內有效地實現溫度變化,從而能在20-30min內快速完成30-40循環,達到樣本擴增的目的[12]。Lightcycler通常使用的實驗材料主要是SYBRI Green I熒光染料和Taqman熒光探針和雜交探針。雖然Lightcycler有相當多的優點,但是這也有一些不足之處,由于它只提供一個32孔的樣品盤,這使得不能在一次進行較多的樣本測定。

3. Bio-rad 公司生產的iCycler iQ:這種儀器提供連續的檢測波長調節,程序滿足實時數據處理,可以同時在一個反應體系中檢測四種熒光信號,由于一批能完成96個樣本的測定,所以能提供相對較快的擴增反應。

4. Strategene公司的MX4000 Multiplex: 這種儀器的檢測波長可在350-750nm范圍內進行調節,以鹵素燈作為激發光源,常選用的實驗材料包括Taqman探針、雜交探針和分子信標(molecular beacon),其樣品盤的規格有多處可供選擇,包括96孔盤、8聯管或單管,其程序也提供實時數據分析。

5. Cepheid公司的Smart Cycler System: 這種儀器正如其名一樣具有強大的功能,它有16種反應模式可供選擇,而且每種模式都有各自的程序,任一模式不僅能同時檢測四種熒光信號,而且不同的使用者可對同一批樣品同時運行不同的模式進行檢測。Smart Cycler System的這種設計雖然有其優點,但是其缺點也是顯而易見的,由于其將樣品盤分得過細,所以不利于同時進行較多樣品的分析。
6. Corbert Research 公司的Rotor-Gene: 這種儀器與Lightcycler相比,屬于中心型熱循環儀,即從反應體系內部進行熱變化;其具有雙光源系統,藍光在470nm處激發熒光,綠光在530nm波長激發熒光;具有兩種樣品盤(32孔和72孔)供選擇;可以對多種熒光材料進行測定 。

 
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