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等電點聚焦

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-08-18
等電點聚焦就是在電泳槽中放入載體兩性電解質,當通以直流電時,兩性電解質即形成一個由陽極到陰極逐步增加的pH梯度,當蛋白質放進此體系時,不同的蛋白質即移動到或聚焦于與其等電點相當的pH位置上,電聚焦的優點是:有很高的分辨率,可將等電點相差0.01-0.02pH單位的蛋白質分開;一般電泳由于受擴散作用的影響,隨著時間和所走的距離加長,區帶越走越寬,而電聚焦能抵消擴散作用,使區帶越走越窄;由于這種電聚焦作用,不管樣品加在什么部位,都可聚焦到其電點,很稀的樣品也可進行分離;可直接測出蛋白質的等電點,其精確度可達0.01pH單位。電聚焦技術的缺點是:一是電聚焦要求用無鹽溶液,而在無鹽溶液中蛋白質可能發生沉淀,二 是樣品中的成分必需停留于其等電點,不適用在等電點不溶或發生變性的蛋白質。 電聚焦技術要求有穩定的pH梯度,要求極防止對流和防止已分離區帶再混合的措施,其辦法有三:密度梯度,聚丙烯酰胺凝膠和區帶對流聚焦,以第一種方法為常用。
 
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