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雜交和放射自顯影

放大字體  縮小字體 發布日期:2006-04-26

 

  固定于濾膜上的RNA的預雜交、雜膠及淋洗等條件,與DNA雜交的相應條件基本相同,F簡述如下1)用下列兩種溶液之一進行預雜交,時間1-2小時。若于42℃進行,應采用。
50%甲酰胺
5xSSPE
2xDenhardt試劑
0.1%SDS
若于68℃進行,應采用:
6xSSC
2xDenhardt試劑
0.1%SDS
2)在預雜交液中加入變性的放射性標記探針,如欲檢測低豐度mRNA, 所用探針的量至少為0.1μg,其放射性比活度應大于2x108計數/(分.μg)在適宜的溫度條件下繼續溫育16-24小時。切記RNA只與雙鏈DNA中一條單鏈互補,因此如用單鏈探針, 則必須是能與RNA互補的一條單鏈。
3)用1xSSC、0.1%SDS于室溫洗漠20分鐘, 隨后用0.2xSSX、 0.1%SDS于68℃洗膜3次每次20分鐘。
4)用X光片(Kodak XAR-2或與之相當的產品)進行放射自顯影, 附加增感屏于-17℃曝光24-48小時。

 

 
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