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選擇材料及預(yù)處理

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-04-26

 

  以蛋白質(zhì)和結(jié)構(gòu)與功能為基礎(chǔ),從分子水平上認(rèn)識生命現(xiàn)象,已經(jīng)成為現(xiàn)代生物學(xué)發(fā)展的主要方向,研究蛋白質(zhì),首先要得到高度純化并具有生物活性的目的物質(zhì)。蛋白質(zhì)的制備工作涉及物理、化學(xué)和生物等各方面知識,但基本原理不外乎兩方面。一是得用混合物中幾個組分分配率的差別,把它們分配到可用機(jī)械方法分離的兩個或幾個物相中,如鹽析,有機(jī)溶劑提取,層析和結(jié)晶等;二是將混合物置于單一物相中,通過物理力場的作用使各組分分配于來同區(qū)域而達(dá)到分離目的,如電泳,超速離心,超濾等。在所有這些方法的應(yīng)用中必須注意保存生物大分子的完整性,防止酸、鹼、高溫,劇烈機(jī)械作用而導(dǎo)致所提物質(zhì)生物活性的喪失。蛋白質(zhì)的制備一般分為以下四個階段:選擇材料和預(yù)處理,細(xì)胞的破碎及細(xì)胞器的分離,提取和純化,濃細(xì)、干燥和保存。

  微生物、植物和動物都可做為制備蛋白質(zhì)的原材料,所選用的材料主要依據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康膩泶_定。對于微生物,應(yīng)注意它的生長期,在微生物的對數(shù)生長期,酶和核酸的含量較高,可以獲得高產(chǎn)量,以微生物為材料時有兩種情況:(1)得用微生物菌體分泌到培養(yǎng)基中的代謝產(chǎn)物和胞外酶等;(2)利用菌體含有的生化物質(zhì),如蛋白質(zhì)、核酸和胞內(nèi)酶等。植物材料必須經(jīng)過去殼,脫脂并注意植物品種和生長發(fā)育狀況不同,其中所含生物大分子的量變化很大,另外與季節(jié)性關(guān)系密切。對動物組織,必須選擇有效成份含量豐富的臟器組織為原材料,先進(jìn)行絞碎、脫脂等處理。另外,對預(yù)處理好的材料,若不立即進(jìn)行實(shí)驗(yàn),應(yīng)冷凍保存,對于易分解的生物大分子應(yīng)選用新鮮材料制備。

 
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