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M41 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集試劑盒(M41 MICROSCREEN®C. DIFFICILE)

放大字體  縮小字體 發布日期:2010-08-04  來源:食品伙伴網整理
核心提示:艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集檢測試劑用于確證鑒定從假膜性結腸炎、與抗生素有關的腹瀉和手術后腹瀉病人的糞便樣品中分離出的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落。

一、用途

艱難梭狀芽孢桿菌乳膠凝集檢測試劑用于確證鑒定從假膜性結腸炎、與抗生素有關的腹瀉和手術后腹瀉病人的糞便樣品中分離出的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落。該試劑盒僅供專業人員使用。

 

二、原理

乳膠顆粒表面包被與艱難梭狀芽孢桿菌細胞壁抗原具有特異性的兔免疫球蛋白抗體。當敏化的乳膠顆粒與艱難梭狀芽孢桿菌菌懸液混合后,敏感而特異的免疫化學反應可使乳膠顆粒迅速形成肉眼可見的凝集。

 

三、試劑盒組成成分

REAG TEST 測試試劑 M41a 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑 2.5mL

乳膠顆粒包被與艱難梭狀芽孢桿菌抗原具有特異性的兔免疫球蛋白。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(藍色瓶蓋)

CONTROL +  陽性對照試劑 M41b 陽性對照  0.5mL

不具活性的艱難梭狀芽孢桿菌抗原,用于與測試試劑反應。含0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(黑色瓶蓋)

NaCl 0.85%  0.85%鹽水 M40 0.85%生理鹽水 5.0mL

0.099%的疊氮化鈉防腐劑。(白色瓶蓋)

 

使用說明書

檢測板

攪拌棒

 

需要的其它材料

l         接種環

l         梭狀芽孢桿菌的選擇性分離平板(CCFACCEY

 

四、警告和注意事項

安全:

1、試劑僅供體外診斷使用。

2、試劑盒作防腐劑使用的疊氮化鈉可與鉛或銅制品反應形成易爆的金屬疊氮化物。可用大量水沖洗以避免疊氮化物的堆積。

3、在處理或檢測可疑致病菌時應采取適當的預防措施。被污染的物品可用3%的次氯酸鈉消毒處理30分鐘。含酸的廢液應作中和處理。

4、陽性對照液在生產中已作惰性處理,但仍應遵循潛在傳染性產品的處理程序

 

檢測過程:

1、試劑盒應按說明書使用。

2、所有試劑在使用前應達到室溫。

3、不要稀釋試劑盒內的任何試劑

4、不要混合不同批次試劑盒的試劑。

5、不要冷凍試劑盒內的試劑。

6、不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到陽性對照試劑或細菌樣品。

7、使用前應確保檢測板清潔干燥。

8、如果陽性對照不發生凝集或乳膠試劑在生理鹽水中自凝,說明試劑已無效。應使用新的試劑盒。

 

 

五、貯存及保質期

檢測試劑盒不使用時應貯存在28℃,并應在包裝盒標簽上的有效期內使用檢測試劑。

 

六、樣本

糞便樣品應接種于增菌肉湯中在37℃培養1824小時后,然后在選擇性平板(CCFACCEY)上培養增菌液。平板應在厭氧環境中37℃培養2448小時。

挑取選擇性分離平板上的艱難梭狀芽孢桿菌可疑菌落,用該試劑盒進行檢測。(程序如下)

 

七、檢測過程

質量控制:

在每次使用檢測試劑盒前應作下列質量控制檢測,以確證試劑的有效性。

1、檢測試劑的控制:滴加1滴生理鹽水(M40)于一個測試反應環內,然后在同一反應環內滴1滴測試試劑(M41a),再用攪拌棒在整個區域內混勻液體,并觀察是否會出現凝集。應無凝集發生。如果出現凝集反應,表明檢測試劑或生理鹽水受到污染,應廢棄處理。

2、陽性對照的控制:輕輕搖勻陽性對照試劑(M41a),并滴1滴于測試反應環內,然后滴1滴測試試劑(M41a)于同一個測試反應環內,再用攪拌棒混勻液體, 2分鐘并觀察凝集。如果未出現凝集反應,則應廢棄該檢測試劑盒。

測試程序:

1、滴1滴生理鹽水(M40)于潔凈的檢測板上的一個反應環內。

2、用接種環從選擇性分離平板上挑取可疑菌落,與反應環內的生理鹽水混合,形成均勻的菌懸液。

3、觀察菌懸液是否會出現自動凝集現象。如果出現自凝現象,即不可用乳膠試劑檢測該菌株。應選用其它的檢測方法。如果沒有出現凝集,進行下一步測試。

4、輕輕搖勻乳膠測試試劑后,滴1滴至反應環內的菌懸液中,不要使檢測乳膠試劑的滴管接觸到菌懸液。

5、用1支干凈的攪拌棒混合菌懸液和測試試劑約30秒,然后輕搖檢測板。

6、在2分鐘內觀察凝集結果。

7、記錄結果后,將攪拌棒和檢測板進行適當的消毒處理。

 

八、結果說明

2分鐘內出現凝集,表明樣品中有艱難梭狀芽孢桿菌,如不出現凝集,表明測試菌落中無艱難梭狀芽孢桿菌。

 

九、使用的局限性

1、結果應依據所有的臨床和實驗室信息進行判斷。分離出艱難梭狀芽孢桿菌不能確診假膜性結腸炎或抗生素性腹瀉。

2、使用乳膠試劑檢測艱難梭狀芽孢桿菌時應選取選擇性平板上可疑菌落,以提高分離率。

3、其它的梭狀芽孢桿菌偶爾也可在CCFA平板上生長,但它們在CCEY平板上的菌落形態與艱難梭狀芽孢桿菌不同,或不生長。

4、分離出的可疑艱難梭狀芽孢桿菌發生自凝現象時,不可采用乳膠試劑檢測,應選用其它方法檢測。

 

十、檢測效果對比

在一個獨立的英國微生物實驗室和和公司內部均分別對Microscreen 艱難梭狀芽孢桿菌乳膠試劑盒與一種已廣泛使用的商業化的乳膠試劑盒做了測試效果對比。用二種商品共檢測137株在選擇性平板上生長的菌落。

 

 

Microscreen

總計

陽性

陰性

另一已廣泛使用的乳膠試劑盒

陽性

85

0

85

陰性

0

52**

52

總計

85

52

 

靈敏度 185/85100%

特異性 52/52100%

一致性 137/137100%

檢測樣品中分離出的85株,其中18株在二種試劑盒中均存在交叉反應,但其中的16株不會在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板中生長或其生長時菌落形態與艱難梭狀芽孢桿菌不同。另外2株(均為C.glycolicum)在其平板上可弱生長,但菌落不具有大多數艱難梭狀芽孢桿菌所特有的熒光。

**其中有2株艱難梭狀芽孢桿菌(血清型A9A10)。其中1株(A10)顯示出輕微異常的菌落形態,其余的50株包括不同種的細菌,其中5株為梭狀芽孢桿菌屬。大部分單個菌落不會在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上生長 或生長時顯示出非典型的可疑菌落。

測試結果顯示Microscreen乳膠凝集檢測試劑盒與這種已廣泛使用的商業化的乳膠試劑盒檢測效果相當。盡管少量菌株在2種試劑盒中均存在假陽性結果,但在艱難梭狀芽孢桿菌的選擇性平板上,不會生長或菌落形態不同。 

  總的來說,用Microscreen艱難梭菌乳膠凝集檢測試劑盒檢測結果與所對比的另一商業化產品結果一致。

 

 

十一、重復性

批內重復性:通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原及一組質控菌株對同1批產品的靈敏度和特異性進行檢測。由不同的操作者隨機測試3次,3個操作者間分析結果無顯著差異。

批間的重復性:通過以系列稀釋度的參照抗原和試劑盒對照抗原及一組質控菌株對3批產品的靈敏度和特異性進行檢測。3個批次間的敏感性和特異性無差異。

廣東環凱微生物科技有限公司  電話:020-32077703
編輯:foodnews

 
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