一、概要
雙酚A(BPA)是生產聚碳酸酯塑料的主要原料之一,而它與乳腺癌、前列腺癌和性早熟有關。BPA無處不在,從礦泉水瓶、醫療器械到及食品包裝的內里,都有它的身影。每年,全世界生產2700萬噸含有BPA的塑料。但BPA也能導致內分泌失調,威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。
雙酚A檢測試劑盒是應用ELISA技術研發的新一代藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等特點, 能最大限度地減少操作誤差和工作強度 。
二、試驗原理
雙酚A檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯抗原,樣本中的殘留物雙酚A與微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗雙酚A的抗體,加入酶標二抗后,經TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含雙酚A的含量成負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數,即可得出樣品中的雙酚A含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測食品包裝袋、塑料瓶等樣本中雙酚A的殘留量。
四、交叉反應率
雙酚A ……………………………………… 100%
五、操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5 加標準品/樣本:加標準品/樣本50l/孔到對應的微孔中,然后加入雙酚A抗試劑50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩干,用洗滌工作液250l/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、加酶標物:加入雙酚A酶標物100l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min,取出重復洗板步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15~20min。
9、測定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內讀完數據),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.5ppb
樣本最低檢測限:5 ppb
回收率:
食品包裝袋…………………………………85±10%
塑料瓶………………………………… 80±10%
精密度:試劑盒的變異系數均小于10%
七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質,應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。
7、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到30min。反之,則減短反應時間。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產品有效期為12個月。
雙酚A(BPA)是生產聚碳酸酯塑料的主要原料之一,而它與乳腺癌、前列腺癌和性早熟有關。BPA無處不在,從礦泉水瓶、醫療器械到及食品包裝的內里,都有它的身影。每年,全世界生產2700萬噸含有BPA的塑料。但BPA也能導致內分泌失調,威脅著胎兒和兒童的健康。癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。
雙酚A檢測試劑盒是應用ELISA技術研發的新一代藥物殘留檢測產品,與儀器分析技術相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等特點, 能最大限度地減少操作誤差和工作強度 。
二、試驗原理
雙酚A檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯抗原,樣本中的殘留物雙酚A與微孔條上預包被的偶聯抗原競爭抗雙酚A的抗體,加入酶標二抗后,經TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含雙酚A的含量成負相關,與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數,即可得出樣品中的雙酚A含量。
三、適用范圍
可定性、定量檢測食品包裝袋、塑料瓶等樣本中雙酚A的殘留量。
四、交叉反應率
雙酚A ……………………………………… 100%
五、操作步驟:
1、將所需試劑從冷藏環境中取出,置于室溫(20~25℃)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、取出需要數量的微孔板,將不用的微孔放入自封袋,保存于2~8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
5 加標準品/樣本:加標準品/樣本50l/孔到對應的微孔中,然后加入雙酚A抗試劑50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min。
6、洗板:小心揭開蓋板膜,將孔內液體甩干,用洗滌工作液250l/孔,充分洗滌4~5次,每次間隔10s,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破)。
7、加酶標物:加入雙酚A酶標物100l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應30min,取出重復洗板步驟6。
8、顯色:加入底物液A液50l/孔,再加底物液B液50l/孔,輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板后置25℃避光環境中反應15~20min。
9、測定:加入終止液50l/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,請在5min內讀完數據),測定每孔OD值。(若無酶標儀,則不加終止液用目測法可進行判定)。
六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度:0.5ppb
樣本最低檢測限:5 ppb
回收率:
食品包裝袋…………………………………85±10%
塑料瓶………………………………… 80±10%
精密度:試劑盒的變異系數均小于10%
七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣本沒有回到室溫(20~25℃)會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況,則會出現標準曲線不成線性,重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒;也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑,摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、試劑變質的跡象發色試劑有任何顏色表明發色劑變質,應當棄之。0標準的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)時,表示試劑可能變質。
7、在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反應時間到30min。反之,則減短反應時間。
八、貯藏條件及保存期
貯藏條件:保存試劑盒于2~8℃。
保存期:該產品有效期為12個月。