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麗春紅(Ponceau S)染色液的配制及使用

放大字體  縮小字體 發布日期:2010-12-18  來源:丁香通
核心提示:麗春紅(Ponceau S)染色液的配制及使用

Molecular Formula:  C22H12N4Na4O13S4

Molecular Weight::760.6

CAS Number:  6226-79-5

λ :  520 nm (water)

麗春紅(Ponceau S)也稱猩紅,可以用于PVDF膜、硝酸纖維素膜(nitrocellulose membrane)和醋酸纖維素膜(cellulose acetate membrane)上的蛋白的檢測。麗春紅帶負電荷,可以與帶正電荷的氨基酸殘基結合,同時麗春紅也可以與蛋白的非極性區相結合,從而形成紅色的條帶。麗春紅染色的靈敏度不及考馬斯亮藍染色。

麗春紅對蛋白的染色是可逆的,染色后可以用蒸餾水,PBS或其它適當溶液洗去。因此,蛋白質N端測序時將SDS-PAGE膠上的蛋白轉移到PVDF膜,用麗春紅染色后將目的條帶切下用于測序。

注意:麗春紅染色液不適用于尼龍膜上的蛋白的檢測。

使用說明

將PVDF膜、硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜浸沒在麗春紅染色液中,搖動5-10分鐘或更長時間;取出印跡膜,用蒸餾水,PBS或其它適當溶液漂洗2-3次,可出現清晰條帶,記錄結果;用蒸餾水,PBS或其它適當溶液漂洗2-3次,每次3-5分鐘,去除麗春紅,進行后續的WB檢測。

補充:麗春紅染色液也可以直接用來染PAGE膠,不過,在染色之前最好用甲醇-乙酸溶液浸泡一下PAGE膠,起到固定蛋白的作用。

麗春紅染色液的配制

常用的麗春紅染色液有兩種:一種用乙酸配制,另外一種用三氯乙酸(TVA)和5-磺基水楊酸(5-Sulfosalicylic acid)配制。配制方法如下:

一、用乙酸配制成分:0.1%(w/v)麗春紅,5%(v/v)乙酸,ddH2O。

 4 ℃保存,不要凍上。也可以配成“0.2%(w/v)麗春紅,3%(v/v)乙酸,ddH2O”。

二、用三氯乙酸和5-磺基水楊酸成分:2% (w/v)麗春紅,30%的三氯乙酸,30%的5-磺基水楊酸。
 

編輯:songjiajie2010

 
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