菌種是用于發酵過程作為活細胞催化劑的微生物，包括細菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來源于自然界大量的微生物，從中經分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于生產。

今天我就帶大家來了解一下菌種相關的小常識。

菌種代碼

國內常見微生物檢驗所用的菌種代號是：

CMCC（F）或 CMCC（B）

CMCC —— 中國醫學菌種保藏中心

B —— 代表細菌， F ——代表真菌。

大腸桿菌 [CMCC (B) 44102]；

乙型副傷寒沙門桿菌 [CMCC (B) 50094]；

銅綠假單胞菌 [CMCC (B)10104]；

金黃色葡萄球菌 [CMCC (B)26003]；

生孢梭菌[CMCC(B)64941]；

白色念珠菌[CMCC(F)98001]。

菌種的復蘇與保存

按照菌種的使用說明以及復蘇液，在超凈工作臺或生物安全柜內進行復蘇和保存。

常用菌種保藏方法

1.瓊脂斜面低溫保存法

（1）方法：

將經常使用的菌種的典型菌落接種在斜面（某些特殊菌種可用液體培養基）上，按規定的溫度和時間培養，待充分生長后，把培養好的新鮮菌種用牛皮紙包好，為減緩培養基的水分蒸發，延長保藏時間，可將菌種保藏管的棉花塞換成橡膠塞。放在4℃左右的冰箱中保藏。每隔 2~3個月傳代一次。若用半固體高層培養基穿刺培養，一般可保藏半年 ~ 一年。

（2）適用范圍：細菌、酵母菌、霉菌保藏。

（3）特點：優點是——簡便，易于推廣；一般不需要另選擇保藏用培養基；對大多數微生物都適用；缺點是——保藏期太短；傳代次數多，易發生變異及污染。

（4）注意事項：

保藏的菌種應是生命活力旺盛的新鮮培養物，至少應是第三代的培養物。

保藏時，破傷風桿菌可用庖肉培養基；生孢梭菌用流體硫乙醇酸鹽培養基。必須定期檢查保藏菌種冰箱的溫度、濕度以及菌種管的棉塞是否松動或生霉，如有異常應及時處理。

每次移植后，應與原菌種的編號、名稱逐一核對，確證培養基特征和純度無誤后再繼續保藏。

保藏菌種的培養基應無糖，其他菌類含糖小于 2 %為宜，以免產酸過多，影響菌種存活。

銅綠假單胞菌在冰箱中易發生菌體自溶而死亡，不宜用本法保存。

2、液體石蠟保存法：

（1）方法：

將菌種接種于斜面或穿刺于0.3~0.5 %瓊脂半固體高層培養基中，培養好備用。取化學純的液體石蠟裝在試管中，每管10~15ml，加棉塞，瓶口包上紙，121℃高壓滅菌30min，取出置37℃溫箱或 110~ 170 ℃烤箱中 1 ~ 2 h 或干燥器內除去液體石蠟中的水分。

將上述液體石蠟加入培養好的菌種試管內，液體石蠟液面以高出培養基最上端1㎝為宜，將試管直立，放入4℃冰箱中保藏。

（2）適用范圍：適用于保藏部分霉菌，酵母菌和放線菌，對細菌保藏效果較差。

（3）特點：本方法簡便易行，是實驗室常用的一種保藏方法，該法主要使菌種與空氣隔絕。

（4）注意事項：

保藏時，用新鮮培養物接種，應檢查純度和特征后，方可進行保藏。

使用菌種時，先將菌種管傾斜使液體石蠟流至一 邊，再用接種針挑取培養物接種到新鮮斜面上培養，待長出新培養物后，再移種一次到新斜面上即可使用。

將沾有少量液體石蠟的接種針浸于95%酒精中片刻，再燒灼滅菌，以免直接在酒精燈下燒灼時，液體石蠟四濺，引起污染。

液體石蠟在菌種管中高出培養基的高度要嚴格控制，如太多，會影響菌種交換氣體，使保藏效果不好；如太少，斜面容易干燥，將縮短保藏期。一般以高出斜面1㎝為宜。

制備無菌液體石蠟時，每管裝量不能太多，否則分裝到菌種培養基中易造成污染。

3、磁珠保存法

將菌液浸入素燒磁珠(或多孔玻璃珠)后再進行干燥保存的一種方法。在螺旋口試管中裝入1/2管高的硅膠(或無水CaSO4)，上鋪玻璃棉，再放上10~20粒磁珠，經干熱滅菌后，接入菌懸液，最后冷藏、室溫保藏或減壓干燥后密封保藏。

本法對酵母菌很有效，特別適用于根瘤菌，可保存長達兩年半時間。

磁珠保存時間更長，使用方便，大大減輕操作人員的工作。

菌種的傳代與保存

方法一：斜面傳代

冰箱取出的菌種斜面，應在室溫放置約30分鐘，待溫度平衡后再移入超凈工作臺或生物安全柜。

點燃酒精燈（滅菌器），用左手握住菌種斜面，將管口靠進火焰旁，右手拿接種棒后端，將接種環燒紅30秒，隨后將全部接種棒金屬部分在火焰上燒灼，往返通過3次。左手將管口在火焰上旋轉燒灼，右手用無名指、小指及掌部夾住試管塞，撥開試管塞，將接種環伸入管內先在近壁的瓊脂斜面上靠一下，稍冷卻再移至菌苔上，刮去少量菌苔，隨即取出接種棒，并將菌種管口移至火焰旁。

堵上試管塞，左手將菌種管放下，取營養瓊脂斜面1支，照上述操作打開試管塞，將接種環伸入管內至瓊脂斜面的低部，由底向上，將接種環輕貼斜面的表面曲折移動，使細菌劃在斜面的表面上。

取出接種棒，在火焰旁將試管塞堵上，然后將接種棒在火焰上燒灼滅菌。

將已接種完的斜面置35~37℃培養22~24小時，霉菌管一般置20~25℃霉菌培養箱內培養7日。取出后放人冰箱保存，一般 3個月轉種一次。

方法2：斜面-營養肉湯-分離平板-斜面

用接種環取上述斜面菌苔少許接種置營養肉湯中(5ml/支,已滅菌)，置35~37℃培養18~24小時后，再用接種環取培養好的營養肉湯菌懸液，接種于分離平板，置35~37℃培養18~24小時，用接種針選典型菌落劃線于營養瓊脂斜面，置35~37℃培養18~24小時。一般同時接種幾支管，其中一支用于以后菌種傳代或接種到半固體瓊脂培養基中，其它用做工作菌種。

常用分離平板：

大腸埃希菌——EMB瓊脂平板；

銅綠假單胞菌——溴化十六烷三甲銨瓊脂培養基；

金黃色葡萄球菌——甘露醇氯化鈉瓊脂培養基。

菌種保管

菌種保管應有專人負責，雙人雙鎖，確保菌種安全。

菌種領用、傳代、保存都要有記錄，包括名稱、入庫、領用、傳代日期、鑒定者、主要鑒定性能及滅活或銷毀情況。