一、實驗目的
1．了解高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)和工作原理
2．學習高效液相色譜儀的使用
3．學習、掌握液相色譜柱柱效測定方法
二、基本原理
    高效液相色譜法是以液體作為流動相的一種色譜分析法，它亦是根據(jù)不同組分在流動相和固定相之間的分配系數(shù)的差異來對混合物進行分離的。氣相色譜中評價色譜柱柱效的方法及計算理論塔板數(shù)的公式同樣適合于高效液相色譜，即：
式中：tR為組分的保留時間
Y1/2為色譜峰的半峰寬度
Y為色譜峰的峰底寬度
三、儀器和試劑
1．KLC321型高效液相色譜儀（紫外檢測器）
2．FJ-2000色譜工作站
3．25μl微量進樣器
4．超聲波清洗器
5．試劑：苯、萘、聯(lián)苯、甲醇均為分析純；純水為重蒸的去離子水。
    配制成含苯、萘、聯(lián)苯各10μl/ml 的甲醇溶液。
四、實驗條件
1．色譜柱  長15cm，內(nèi)徑 3mm，裝填10mm的C-18烷基鍵合固定相
2．流動相  甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min
3．紫外光度檢測器  波長254nm，靈敏度0.08
4．進樣量  5μl
五、實驗步驟
1．將配制好的流動相置于超聲波清洗器上脫氣約30min。
    2．根據(jù)實驗條件，按儀器操作步驟將儀器調(diào)節(jié)至進樣狀態(tài)，待儀器流路及電路系統(tǒng)達到平衡，色譜工作站之“采樣系統(tǒng)”基線平直時，即可進樣。
    3．吸取5μl苯、萘、聯(lián)苯的甲醇溶液進樣，并用色譜工作站記錄色譜數(shù)據(jù)，同時記錄色譜數(shù)據(jù)文件名。
    4．用色譜工作站之“數(shù)據(jù)處理”系統(tǒng)處理數(shù)據(jù)文件。
六、數(shù)據(jù)記錄及處理
1．記錄實驗條件。
（1）色譜柱與固定相
（2）流動相及其流量、柱前壓
（3）檢測器及其靈敏度
（4）進樣量
2．記錄色譜峰的保留時間tR和相應色譜峰的半峰寬Y1/2。
3．分別計算苯、萘、聯(lián)苯在該色譜柱上的理論塔板數(shù)n。
七、思考題
1．由本實驗計算出的各組分理論塔板數(shù)說明什么問題？
2．紫外光度檢測器是否適用于檢測所有有機化合物，為什么？