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HPLC 故障及排除方法

放大字體  縮小字體 發布日期:2013-09-27  來源:儀器設備行業網  瀏覽次數:955
核心提示:詳細說明:診狀 可能的原因 解 決 方 法 一 保留時間變化 1.柱溫變化 柱恒溫 2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動
 詳細說明:
診狀 可能的原因 解 決 方 法 一 保留時間變化 1.柱溫變化 柱恒溫 2.等度與梯度間未能充分平衡 至少用10倍柱體積的流動相平衡柱 3.緩沖液容量不夠 用>25mmol/L的緩沖液 4.柱污染 每天沖洗柱 5.柱內條件變化 穩定進樣條件,調節流動相 6.柱快達到壽命 采用保護柱 二 保留時間縮短 1.流速增加 檢查泵,重新設定流速 2.樣品超載 降低樣品量 3.鍵合相流失 流動相PH值保持在3~7.5檢查柱的方向 4.流動相組成變化 防止流動相蒸發或沉淀 5.溫度增加 柱恒溫 三 保留時間延長 1.流速下降 管路泄漏,更換泵密封圈,排除泵內氣泡 2.硅膠柱上活性點變化 用流動相改性劑,如加三乙胺,或采用堿至鈍化柱 3.鍵合相流失 同前二3 4.流動相組成變化 同前二4 5.溫度降低 同前二5 四 出現肩峰或分叉 1.樣品體積過大 用流動相配樣,總的樣品體積小于第一峰的15% 2.樣品溶劑過強 采用較弱的樣品溶劑 3.柱塌陷或形成短路通道 更換色譜柱,采用較弱腐蝕性條件 4.柱內燒結不銹鋼失效 更換燒結不銹鋼,加在線過濾器,過濾樣品 5.進樣器損壞 更換進樣器轉子 五 鬼峰 1.進樣閥殘余峰 每次用后用強溶劑清洗閥,改進閥和樣品的清洗 2.樣品中未知物 處理樣品 3.柱未平衡 重新平衡柱,用流動相作樣品溶劑 尤其是離子對色譜 4.三氟乙酸TFA氧化肽譜 每天新配,用抗氧化劑 5.水污染反相 通過變化平衡時間檢查水質量,用HPLC級的水 六 基線噪聲 1.氣泡尖銳峰 流動相脫氣,加柱后背壓 2.污染隨機噪聲 清洗柱,凈化樣品,用HPLC級試劑 3.檢測器燈連續噪聲 更換氘燈 4.電干擾偶然噪聲 采用穩壓電源,檢查干擾的來源如水浴等 5.檢測器中有氣泡 流動相脫氣,加柱后背壓 七 峰拖尾 1.柱超載 降低樣品量,增加柱直徑采用較高容量的固定相 2.峰干擾 清潔樣品,調整流動相 3.硅羥基作用 加三乙胺,用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動相PH值,鈍化樣品 4.同前四4 同前四4 5.同前四3 5.同前四3 6.死體積或柱外體積過大 連接點降至最低,對所有連接點作合適調整,盡可能采用細內徑的連接管 7.柱效下降 用較低腐蝕條件,更換柱,采用保護柱 八 峰展寬 1.進樣體積過大 同四1 2.在進樣閥中造成峰擴展 進樣前后排出氣泡以降低擴散 3.數據系統采樣速率太慢 設定速率應是每峰大于10點 4.檢測器時間常數過大 設定時間常數為感興趣第一峰半寬的10% 5.流動相粘度過高 增加柱溫,采用低粘度流動相 6.檢測池體積過大 用小體積池,卸下熱交換器 7.保留時間過長 等度洗脫時增加溶劑含量也可用梯度洗脫 8.柱外體積過大 將連接管徑和連接管長度降至最小 9.樣品過載 進小濃度小體積樣品
編輯:songjiajie2010

 
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關鍵詞: HPLC 故障 排除
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