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HPLC系統(tǒng)內(nèi)部可能的污染物來(lái)自人的觸摸，暴露在實(shí)驗(yàn)室化學(xué)環(huán)境，與零部件制造相關(guān)的殘留物，或來(lái)自先前的流動(dòng)相和樣品的殘余物。雖然HPLC系統(tǒng)自身也會(huì)逐步地被流動(dòng)相清洗，但某些釋放出的雜質(zhì)會(huì)吸附在色譜柱上以及檢測(cè)器潤(rùn)濕的表面上，因而會(huì)降低總的性能。
•磷酸清洗：通常用于從系統(tǒng)中除去有機(jī)雜質(zhì)。可能是由于洗滌作用，它似乎比強(qiáng)有機(jī)溶劑更好也更快。這一步清洗必須在硝酸鈍化之前完成。
•硝酸鈍化：實(shí)際上是作用于不銹鋼表面，在表面上生成均勻的氧化層。這層氧化膜保護(hù)不銹鋼免受腐蝕(鹵化物，螯合劑，等等)并且盡量減少浸出的金屬離子進(jìn)入流動(dòng)相。
以下應(yīng)用需要在使用前做磷酸清洗和硝酸鈍化，包括：
•所有的氨基酸分析系統(tǒng)；
•所有包含電化學(xué)檢測(cè)器的系統(tǒng)；
•所有要分析無(wú)機(jī)陽(yáng)離子，包括過(guò)渡金屬的系統(tǒng)；
•所有利用柱后添加衍生試劑或絡(luò)合樣品組分的系統(tǒng)。
以下應(yīng)用需要在使用前只做磷酸清洗，包括：
•所有常規(guī)用途的、可能在低pH環(huán)境下在低紫外檢測(cè)波長(zhǎng)下運(yùn)行的HPLC系統(tǒng)；
•所有需要高靈敏度性能的梯度紫外檢測(cè)系統(tǒng)。
一準(zhǔn)備工作
首先，摘下色譜柱，用兩通或接頭取代色譜柱。在實(shí)行這一清洗步驟時(shí)，如果有可能選擇監(jiān)測(cè)的紫外波長(zhǎng)為：254nm。通過(guò)軟件或移去電纜的方式取消紫外檢測(cè)器的自動(dòng)回零功能。
二具體步驟
1、用甲醇徹底沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過(guò)泵的所有管路。
2、用水徹底沖洗系統(tǒng)，以等比例方式通過(guò)泵的所有管路。
3、以等比例方式通過(guò)泵的所有管路導(dǎo)入～30%v/v磷酸水溶液。以1mL/min流速洗大約一個(gè)小時(shí)。在沖洗期間活動(dòng)所有的閥，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。
4.用水徹底沖洗所有管路和系統(tǒng)。
必要時(shí)用6N硝酸(HN03)重復(fù)以上步驟。否則，跳到第7步。注意：硝酸是一個(gè)強(qiáng)紫外吸收溶液。除非絕對(duì)需要，不要做鈍化程序。
5.以等比例方式通過(guò)泵的所有管路導(dǎo)人6N硝酸水溶液(大約是40%)。以1mL/min流速洗大約一個(gè)小時(shí)。
6.用水徹底沖洗系統(tǒng)，仔細(xì)檢查是否有任何滲漏，在沖洗期間反復(fù)活動(dòng)所有的閥，包括：參比閥、進(jìn)樣閥及旁路閥等等。
注意：如果你要用低于270nm的紫外波長(zhǎng)作檢測(cè)，則需要更大量水的清洗過(guò)程，不斷的換新鮮水并活動(dòng)各個(gè)閥(沖洗進(jìn)樣器，等)以便從系統(tǒng)中除去所有的痕量硝酸根離子。硝酸清洗后經(jīng)常在幾天之內(nèi)都會(huì)觀(guān)察到在低紫外波長(zhǎng)下有負(fù)的基線(xiàn)漂移。勤換水和有耐心是盡快消除紫外本底的關(guān)鍵。
7.返回到甲醇洗，然后繼續(xù)用實(shí)驗(yàn)所需的溶劑沖洗。
8.通過(guò)軟件或接上電纜的方式重新使紫外檢測(cè)器的自動(dòng)回零功能恢復(fù)。