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峰形咋看都不好,原因這里找一找~

放大字體  縮小字體 發布日期:2023-11-24
核心提示: 在做樣品分析過程中,經常會出現色譜峰圖異常的現象,比如前沿或者拖尾,這給我們的分析檢測造成了很大的困擾。導致峰形異
 在做樣品分析過程中,經常會出現色譜峰圖異常的現象,比如前沿或者拖尾,這給我們的分析檢測造成了很大的困擾。
導致峰形異常的原因有很多,接下來帶大家了解一下常見的影響因素:
1超載
 當供試品進樣量和進樣體積在安全的范圍內,改變進樣量和體積會相應地影響到峰高和峰面積,而保留時間、峰寬和分離度的影響并不大,但當進樣體積或者質量很大的時候,就會造成超載現象,伴隨著峰寬增加、峰型變差和分離度降低。
柱長在50~250mm,內徑4~5mm的色譜柱,單個樣品的進樣質量應該在50μg以內,進樣體積小于25 μL。超載分為體積超載和質量超載兩種,下面將分別對這兩個超載對分離的影響做介紹。
(1)體積超載
(2)質量超載
超載會影響到色譜峰形,當進樣體積和質量在合適的范圍內,是獲得良好峰形的保證,而又有哪些因素可以導致前延和拖尾呢,下面我們接著說。
2前延:(拖尾因子Tf<0.95)
1. 溶劑效應的影響
(1)用流動相溶解樣品:
a.用純甲醇溶解樣品
b.用流動相溶解樣品
(2)先強溶劑溶解樣品,然后用流動相稀釋
a.純甲醇溶解
b.用流動相溶解樣品
2、緩沖作用不合適:
a. 流動相為:乙腈:3%磷酸:無水乙醇=80:10:10
b.流動相為:(乙腈:3%磷酸:無水乙醇=80:10:10):50mM磷酸二氫鈉=80:20
3、儀器系統不合適:
當超高效色譜柱(Ultimate® XB-C18,4.6×50mm,1.8μm)在常規的液相色譜儀上使用時,由于系統死體積大,會影響到峰形
3拖尾:(拖尾因子Tf>1.05)
1. 降低pH,抑制硅羥基的電離
a. 流動相:甲醇:磷酸鹽緩沖溶液=70:30(混合好后,測得pH為4.07)
b.流動相:甲醇:磷酸鹽緩沖溶液=70:30(甲醇和磷酸鹽緩沖溶液混合好后用磷酸調節pH至2.49)
2、增加緩沖鹽,加大緩沖作用
a. 流動相:甲醇:水=75:25  
b. 流動相:甲醇:50mmol/L磷酸二氫鈉溶液=75:25 (混合好后,用三乙胺調節pH至8.40, 即200ml混合好的溶液中加入75ul三乙胺) 
3、因為每種緩沖鹽的緩沖能力不一樣,可以通過更換緩沖鹽來調整:
a. 流動相:5mmol/L磷酸鹽緩沖液(用磷酸調節pH值為4.4)-甲醇-乙腈(40:20:10)
b. 流動相:5mmol/L醋酸鹽緩沖液(用醋酸調節pH值為4.4)-甲醇-乙腈(40:20:10)
4、屏蔽硅羥基的影響(如加入三乙胺)
a.流動相:磷酸鹽緩沖溶液:甲醇=80:20b.流動相:磷酸鹽緩沖溶液:甲醇:三乙胺=80:20:
編輯:songjiajie2010

 
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