在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

食品伙伴網服務號
當前位置: 首頁 » 儀器設備 » 微生物檢測儀器 » 顯微鏡 » 正文

非標記抗體免疫電鏡技術

放大字體  縮小字體 發布日期:2010-11-20  來源:丁香通
核心提示:非標記抗體免疫電鏡技術

一、 原理

標記抗體法雖然具有許多優點,但也存在一些難以克服的問題,如標記抗體的分子增大,對細胞膜和組織的穿透力減弱;化學交聯反應對抗體和酶的活性有所影響;結合物中未標記的抗體可與抗原競爭結合,影響檢測方法的敏感性等。不標記抗體法可以避免上述的不利影響因素,通過一系統的非標記抗體的免疫學反應,對組織中的抗原進行定位檢測。不標記抗體法又可分為用標記物顯示和不同標記物顯示兩種方法。前者利用基因工程方法制備雙特異性抗體的F(ab′)2,一個Fab片段與標本中的抗原結合,一個Fab是抗體蛋白的結合片段。在抗體與標本作用后,再加入鐵蛋白與抗體結合,從而顯示組織內抗原的所在部位。后者則用磷酸鎢負染后,直接電鏡觀察。

二、材料及試劑

1.待檢病毒材料  如:糞便,氣管分泌物、腦脊髓液、組織培養液等。

2.高速離心機

3.已知抗體

4.磷鎢酸

5.瓊脂糖

6.其它

三、操作方法

1.經典法

(1)將被檢病毒材料0.9ml,加1︰5~1︰10稀釋的特異性免疫血清0.1ml充分混合。

(2)置37℃作用1h或37℃1h后再置4℃過夜。

(3)以17 000r/min~23 000r/min離心90min。

(4)吸去上清,將離心管口倒置于濾紙上,吸去殘留液體。

(5)沉淀物中加少量H2O混懸,用3%磷鎢酸(pH6.0)負染20~30s,滴加于400目銅網Fomnvar膜上,用濾紙從銅網邊緣輕輕吸去多余的負染液。

(6)在透射電鏡下4×104倍觀察。

2.快速法(瓊脂擴散法)

(1)同經典法(1)、(2)步驟,制備免疫復合物。

(2)以生理鹽水或pH 7.2巴比妥緩沖液制備1%瓊脂糖,趁熱澆注于潔凈的載玻片上,每片3ml,待冷卻凝固后,在凝膠面上等距離放置直徑4mm玻璃珠數粒,再于凝膠面上澆注1%瓊脂糖2ml~3ml,冷卻凝固后,取出玻璃珠,使凝膠形成凹孔。

(3)將普通濾紙剪成2×3cm大小,3~4層重疊。用小刀將帶有凹孔的瓊脂糖切成小塊,每塊帶有一個凹孔,平放在濾紙上。

(4)在凹孔內,加入制備好的含病毒的免疫復合物懸液。

(5)將電鏡載網的Fomnvar膜面向下倒懸于液滴上。由于瓊脂糖的吸水作用,20min~30min后,可將液滴的水分吸干,而濃縮的免疫復合物則粘附在載網膜上。

(6)在載網膜上滴加3%磷鎢酸負染20s,過量的負染液用濾紙在載網邊緣輕輕吸去。

(7)于透射電鏡4×104倍下觀察。

四、結果判定

直接觀察病毒粒子的形態。由于離心濃縮的處理和特異性抗體的加入,大大提高了觀察的敏感性。
 

編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網刊訂閱 ]  [ 儀器設備搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦儀器設備
點擊排行
 
 
Processed in 0.069 second(s), 17 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 国产成人三级经典中文 | 好男人社区在线观看www | 午夜激情福利网 | 四虎影院在线观看网站 | 狠狠色噜噜狠狠狠狠999米奇 | 免费啪视频观在线视频在线 | 天天色天天| h版欧美一区二区三区四区 h网站亚洲 | 成人在线91| 222aaa免费| 免费人成a大片在线观看动漫 | 天天拍拍天天爽免费视频 | 日本三级成人中文字幕乱码 | 免免费看片 | 男女交性永久免费视频播放 | free性乌克兰高清videos | 欧美高清一区 | 欧美一区二区三区在线观看 | 色综合97天天综合网 | 午夜黄色一级片 | 成年香蕉大黄美女美女 | 中文字幕一区二区三区在线不卡 | 日本一区二区三区四区视频 | 躁天天躁中文字幕在线 | 国产成人mv 在线播放 | 伊人一区二区三区 | 亚洲午夜一区二区三区 | 久久久精品免费观看 | 日韩一级在线观看 | dy天堂 | 456性欧美欧美在线视频 | 日本特级视频 | 亚洲国产成人久久精品影视 | 国产成人高清精品免费5388密 | 欧美精品网 | 国产三级在线 | 好爽毛片一区二区三区四 | 噜噜啪啪 | 久久视频免费 | 免费黄色在线视频 | 色综合天天综一个色天天综合网 |