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微生物實驗室最少不了的實驗儀器之一就是滅菌器，一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB 4789.1-2016中要求：實驗設備應定期進行檢查和/或檢定（加貼標志）、維護和保養，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢？如果要做類似的驗證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關內容。
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進行驗證。
一、化學指示劑法原理：化學指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數。一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。它是由熱敏化學物質與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續20min或130℃持續4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法原理：留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度。驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求，因此是滅菌器驗證的最低標準。
三、自制測溫管法原理：利用一些化學藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學藥品密封在小玻璃管內，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內放進滅菌器，滅菌結束就可以觀察苯甲酸的狀態來驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度，對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
四、生物指示劑法原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養2-7天，若培養基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養液的玻璃管擠碎，培養液從內部的小管中被放出，放入56℃培養箱中培養，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內的芽孢復活后生長會改變肉湯的顏色是肉湯變為黃色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實驗室應當自行制定驗證頻次規定，并嚴格按照要求進行。從操作性和驗證結論兩個方面出發，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進行全面的驗證。
附：滅菌時的注意事項（一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣）使用高壓蒸氣滅菌器時，首先應注意在開放蒸氣的同時，排除滅菌器內的冷空氣。必須將器內冷空氣全部排除后，才可關閉排氣孔。假如滅菌器內仍存留有部分空氣時，則壓力表上雖已達到了某一壓力值，但器內之溫度仍未達到相應之度數。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發酵法培養基滅菌時會出現小導管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內的冷空氣，有奇效哦）。
文章來源：網絡
高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據自己實驗室的具體情況選擇其中一種或多種方法進行驗證。
一、化學指示劑法原理：化學指示劑在一定溫度與作用時間下，會受熱變色或變形，根據這一特點來判斷是否達到需要的滅菌參數。一般實驗室常用的是3M壓力滅菌指示膠帶，這種指示膠帶是利用滅菌前后膠帶顏色變化來判斷滅菌效果。它是由熱敏化學物質與顯色劑及漆輔料制成油墨，并將油墨以條紋狀印制在特制的一面膠紙帶制成。指示膠帶可以直接粘貼于包裹外，長度不低于5cm，并輕壓膠帶以增加粘性和封包效果；在121℃持續20min或130℃持續4min后，膠帶上印有的斜行的白色指示線條會完全變黑，成為黑色線條；如變色不均勻或不徹底，可認為該包裹不符合滅菌條件。
二、留點溫度計法原理：留點溫度計法是利用水銀溫度計不回流的特性，其原理跟傳統體溫計相似，可以指示滅菌器在滅菌過程中達到的最高溫度。驗證時把水銀溫度計放在盛水的大三角瓶里，滅菌時把三角瓶放在滅菌器的上部和下部，滅菌結束后看水銀溫度計的溫度和要求溫度是否一致。此法只能驗證溫度，不能指示滅菌時間是否達到要求，因此是滅菌器驗證的最低標準。
三、自制測溫管法原理：利用一些化學藥品受熱熔化后再冷卻，晶體的外形不同的特性，把化學藥品密封在小玻璃管內，滅菌時放在滅菌器里，滅菌完后觀察晶體的形狀，就可以判斷溫度是否達標。常用的試劑是苯甲酸，苯甲酸的熔點為121-123℃，跟我們要求的滅菌器的滅菌溫度基本吻合，因此滅菌時把固體苯甲酸密封在小玻璃管內放進滅菌器，滅菌結束就可以觀察苯甲酸的狀態來驗證滅菌器是否達到了要求溫度。這種方法的局限跟留點溫度計法相同，也只能指示滅菌時的溫度，對滅菌時間是否達到要求無法判斷。
四、生物指示劑法原理：利用非致病性的嗜熱脂肪桿菌的芽孢作為指示菌，來測定熱力滅菌的效果。嗜熱脂肪桿菌的芽孢對熱的抗性較強，其耐熱能力與病原微生物肉毒梭菌芽孢相似，以此為指示菌，驗證滅菌器能否達到滅菌要求。生物指示劑分為三種：芽孢懸液、芽胞菌片、菌片和培養基混合指示管。一般放在滅菌容器的5個點：下層的前、中、后和上層、中層的中央點。滅菌后取指示劑接種到溴甲酚紫-葡萄糖蛋白胨水中，55-60℃培養2-7天，若培養基澄清、顏色沒有變化即說明芽孢被殺死，滅菌器滅菌效果良好；如果培養基黃色渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌器滅菌效果不合格。芽孢懸液和芽孢菌片的驗證方法均是如此。目前實驗室還常用商品化的生物指示管，其原理與芽孢懸液和芽胞菌片相同，指示管中有嗜熱脂肪芽孢桿菌芽孢和培養液玻璃小管，將指示管放在滅菌容器內的各個點上，高壓滅菌后，將管中盛培養液的玻璃管擠碎，培養液從內部的小管中被放出，放入56℃培養箱中培養，同時做陽性對照。若是滅菌器滅菌效果不合格，指示管內的芽孢復活后生長會改變肉湯的顏色是肉湯變為黃色；若是滅菌器滅菌效果良好則管內芽孢被滅活不再生長，肉湯仍舊是原來的紫色。對于滅菌器的效果驗證，目前并沒有相關標準嚴格的要求驗證的頻次，但是實驗室應當自行制定驗證頻次規定，并嚴格按照要求進行。從操作性和驗證結論兩個方面出發，小編推薦使用指示膠帶和生物指示管，因為這兩種方法操作簡單，可以對滅菌效果進行全面的驗證。
附：滅菌時的注意事項（一些進口的全自動滅菌鍋可不用考慮排氣）使用高壓蒸氣滅菌器時，首先應注意在開放蒸氣的同時，排除滅菌器內的冷空氣。必須將器內冷空氣全部排除后，才可關閉排氣孔。假如滅菌器內仍存留有部分空氣時，則壓力表上雖已達到了某一壓力值，但器內之溫度仍未達到相應之度數。存留的空氣越多，則二者相差也越大，器內溫度不足，滅菌則不徹底。（很多人在做發酵法培養基滅菌時會出現小導管中有氣泡，不妨也可以嘗試多排出滅菌器內的冷空氣，有奇效哦）。
文章來源：網絡
