為了徹底除去填充物中的殘留溶劑和某些揮發性的物質,氣相色譜柱使用一段時間后柱子里面會有高沸點雜質殘留,這些殘留的污染物和樣品作用,容易導致色譜峰拖尾,雜質峰等問題;另一方面是促進固定液均勻牢固地分布在擔體的表面上,降低由于柱子流失而引起的本底噪聲。
色譜柱長期在高溫下使用,固定相會緩慢流失,這就造成了毛細管柱內壁活性基團硅基暴露,暴露的硅基吸附樣品也會造成色譜峰拖尾,以及基線起伏、噪聲升高等問題。
為了避免發生這些情況,我們就需要對使用時間較長的氣相色譜柱進行老化操作,老化可以除去色譜柱中殘留的污染物。也可以讓色譜柱內壁上的固定相熱脹冷縮后重新覆蓋住部分活性點,這樣就延長了色譜柱的使用壽命。
關于氣相色譜柱的老化,一直有各種各樣的說法,比如有設個緩慢的升溫程序走一整晚的,也有忽高忽低走好幾次循環的,也有些實驗室就簡單粗暴的直接升到高溫下烘烤。
那到底怎樣做才能有好的效果呢?
老化溫度
老化的最高溫度通常推薦設為方法最高設定溫度和色譜柱耐受溫度的中間值。
值得注意的是色譜柱老化時溫度越高伴隨著固定相的流失也會越嚴重,所以老化溫度以及老化時間需要精確把握。
色譜柱老化的溫度并不建議越高越好,而是在保證能趕走污染物的前提下溫度越低越好。
具體的老化程序,通常會緩慢升溫至老化溫度,比如2~5攝氏度/min,然后再繼續老化2個小時 。程序升溫的速率可以根據自己的經驗或者實驗要求來設置。
而老化柱子的時間最主要還是要根據測定的樣品來判斷。如果經常性的使用儀器,那么就可以定為一到兩個星期老化一次,老化時間也不用太長,可以直接升到老化溫度,0.5-1個小時左右足夠了。如果是長時間使用的色譜柱,并且色譜柱進樣品端已經黑了,那就要系統老化。截去進樣口端0.5-1米的長度,再以5度/分鐘的速率升到老化溫度,保持20-30分鐘后再降溫到初始,再以5度/分鐘的速率升到老化溫度這樣循環兩次。必要的時候要進行清洗和再生。
柱子內部是看不到,摸不到的,所以是不是老化好了一般根據老時間來判斷,而這個時間是很多做色譜柱的人總結出來的。
比糾結具體的升溫速率更重要的事情是 對避免氧氣的存在,這也是老化失敗最常見原因。
因為高溫下的氧氣是破壞化學鍵的好手,而色譜柱里的固定相一旦氧化,彼此間的鍵鍵鏈接會被破壞,固定相就不再能穩定“固定”在色譜柱里,造成大量柱流失,柱效也會大幅下降。
另外,從避免污染的角度來說,新柱子老化的時候, 好不要連接檢測器。
如果是FID檢測器,可以不用點火,也不用開氫氣和空氣。
新填充的色譜柱不能馬上使用還需要進行老化處理。老化的目的有兩個,一是為了徹底除去填充物中的殘余溶劑,和某些揮發性雜質,另一個目的是促進固定液均勻的、牢固分布在單體的表面上。