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色譜柱的八大注意事項,增加你的色譜柱壽命

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-08-30
核心提示:液相色譜柱是液相色譜分離能力的核心部分,學會正確使用液相色譜柱,了解液相色譜的一些使用注意事項可以避免一些不必要的麻煩,進而提高實驗人員的工作效率。下面就來看看吧
 1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動
溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料,因此,在調節流速時應該緩慢進行,在閥進樣時閥的轉動不能過緩。

2、應逐漸改變溶劑的組成
特別是反相色譜中,不應直接從有機溶劑改變為全部是水,反之亦然。

3、一般說來色譜柱不能反沖
只有生產者指明該柱可以反沖時,才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。

4、選擇使用適宜的流動相(尤其是pH),以避免固定相被破壞。
有時可以在進樣器前面連接一預柱,分析柱是鍵合硅膠時,預柱為硅膠,可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質被溶解。

5、經常用強溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內的雜質。
在進行清洗時,對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右。

下面列舉一些色譜柱的清洗溶劑及順序,作為參考:
  • 硅膠柱以正已烷(或庚烷)、二氯甲烷和甲醇依次沖洗,然后再以相反順序依次沖洗,所有溶劑都必須嚴格脫水。

  • 甲醇能洗去殘留的強極性雜質,已烷使硅膠表面重新活化。反相柱以水、甲醇、乙腈、一氯甲烷(或氯仿)依次沖洗,再以相反順序依次沖洗。如果下一步分析用的流動相不含緩沖液,那么可以省略最后用水沖洗這一步。

  • 四氫呋喃與乙腈或甲醇的混合溶液能除去類脂。有時也注射二甲亞砜數次。此外,用乙腈、丙酮和三氟醋酸(0.1%)梯度洗脫能除去蛋白質污染。

  • 陽離子交換柱可用稀酸緩沖液沖洗,陰離子交換柱可用稀堿緩沖液沖洗,除去交換性能強的鹽,然后用水、甲醇、二氯甲烷(除去吸附在固定相表面的有機物)、甲醇、水依次沖洗。


6、保存色譜柱
應將柱內充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。

7、色譜柱使用過程中壓力升高的原因
如果壓力升高,一種可能是燒結濾片被堵塞,這時應更換濾片或將其取出進行清洗;另一種可能是大分子進入柱內,使柱頭被污染;
如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現塌陷,死體積增大。
在后兩種情況發生時,小心擰開柱接頭,用潔凈小鋼將柱頭填料取出1~2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱,壓平,再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善,但是很難恢復到新柱的水平。

柱子失效通常是柱端部分,在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5~30mm),可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效,這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料,只能在pH=2~9范圍內使用。柱子使用一段時間后,可能有一些吸附作用強的物質保留于柱頂,特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。

8、新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷,使柱效下降,這時也可補加填料使柱效恢復。

每次工作完后,最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗,例如,ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時,使用完后應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道,不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用,應每隔4~5天開機沖洗15分鐘。

 

編輯:songjiajie2010

 
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