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瓊脂糖凝膠電泳原理

放大字體  縮小字體 發布日期:2024-02-05  來源:上海聯碩生物科技有限公司
核心提示: 原理: 瓊脂糖凝膠電泳的分析原理與其他支持物電泳主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。 瓊脂糖
 原理: 

瓊脂糖凝膠電泳的分析原理與其他支持物電泳主要區別是:它兼有“分子篩”和“電泳”的雙重作用。 

瓊脂糖凝膠具有網絡結構,物質分子通過時會受到阻力,大分子物質在涌動時受到的阻力大,因此在凝膠電泳中,帶電顆粒的分離不僅取決于凈電荷的性質和數量,而且還取決于分子大小,這就大大提高了分辨能力。但由于其孔徑相比于蛋白質太大,對大多數蛋白質來說其分子篩效應微不足道,現廣泛應用于核酸的研究中。

蛋白質和核酸會根據pH不同帶有不同電荷,在電場中受力大小不同,因此跑的速度不同,根據這個原理可將其分開。電泳緩沖液的pH在6~9之間,離子強度0.02~0.05為適。常用1%的瓊脂糖作為電泳支持物。瓊脂糖凝膠約可區分相差100bp的DNA 片段,其分辨率雖比聚丙烯酰胺凝膠低,但它制備容易,分離范圍廣。普通瓊脂糖凝膠分離DNA的范圍為0.2-20kb,利用脈沖電泳,可分離高達107bp的DNA 片段。 

DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷,在電場中向正極移動。由于糖-磷酸骨架在結構上的重復性質,相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷,因此它們能以同樣的速率向正極方向移動。

編輯:songjiajie2010

 
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