在线观看亚洲精品专区-在线观看亚洲免费-在线观看亚洲免费视频-在线观看亚洲欧美-欧美freexxx-欧美free嫩交video

食品伙伴網(wǎng)服務(wù)號
當(dāng)前位置: 首頁 » 儀器設(shè)備 » 分子生物學(xué)儀器 » 正文

PCR反應(yīng)擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶(雜帶)解決方案

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2024-07-18  來源:上海撫生實業(yè)有限公司
核心提示:  聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dN

  聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)是在體外進(jìn)行的由引物介導(dǎo)的酶促DNA擴(kuò)增反應(yīng)。PCR的原理是在模板DNA、PCR引物、四種脫氧核糖核苷酸(dNTP)及適當(dāng)濃度的Mg2+存在的條件下,依賴于DNA聚合酶的體外酶促合成反應(yīng)。兩個引物分別位于靶序列兩端,同兩條模板的3’端互補,由此限定擴(kuò)增片段。PCR反應(yīng)由一系列的變性→退火→延伸反復(fù)循環(huán)構(gòu)成,即在高溫下模板雙鏈DNA變性解鏈,然后在較低溫度下同過量引物退火,再在適中溫度下由DNA聚合酶催化進(jìn)行延伸。理論上,經(jīng)過N次循環(huán)可使特定片段擴(kuò)增到2n-1,考慮到擴(kuò)增效率達(dá)不到100%,所以通常經(jīng)25到30次循環(huán)可擴(kuò)增到106倍,足夠后續(xù)實驗展開。

  擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)多條帶(雜帶):

  1、 引物用量偏大,引物的特異性不高。應(yīng)調(diào)換引物或降低引物的使用量。

  2、 循環(huán)的次數(shù)過多。適當(dāng)增加模板的量,減少循環(huán)次數(shù)。

  3、 酶的用量偏高或酶的質(zhì)量不好,應(yīng)降低酶量或調(diào)換另一來源的酶。

  4、 退火溫度偏低,退火及延伸時間偏長。應(yīng)提高退火溫度,減少變性與延伸時間,也可采用二種溫度的PCR擴(kuò)增。以2度為梯度設(shè)計梯度PCR反應(yīng)優(yōu)化退火溫度。

  5、 樣品處理不當(dāng)。

  6、 Mg2+濃度偏高,因適當(dāng)調(diào)整Mg2+使用濃度。

  7、 若為PCR試劑盒,也可能時試劑盒本身質(zhì)量有問題。

  8、 復(fù)制提前終止。使用非熱啟動的聚合酶時常有發(fā)生。冰上準(zhǔn)備反應(yīng)體系或采用熱啟動聚合酶。

  9、 反應(yīng)緩沖液未全融化或未充分混勻。確保反應(yīng)緩沖液融化全并全混勻。

  10、 引物特異性差。利用BLAST檢查引物特異性或重新設(shè)計引物。

  11、 引物量過多。減少反應(yīng)體系中引物的用量。

  12、 模板量過多。質(zhì)粒DNA的用量應(yīng)<50ng,而基因組DNA則應(yīng)<200ng。

  13、 外源DNA污染。確保操作的潔凈。

編輯:songjiajie2010

 
分享:
[ 網(wǎng)刊訂閱 ]  [ 儀器設(shè)備搜索 ]  [ ]  [ 告訴好友 ]  [ 打印本文 ]  [ 關(guān)閉窗口 ] [ 返回頂部 ]
 

 
 
推薦圖文
推薦儀器設(shè)備
點擊排行
 
 
Processed in 0.016 second(s), 15 queries, Memory 0.88 M
主站蜘蛛池模板: 欧美一区二区三区成人看不卡 | 天天干网 | 男人资源网 | 让她爽的喷水叫爽乱 | 色噜噜噜噜噜 | 99久久精品费精品国产一区二区 | 国模极品一区二区三区 | 伊人欧美在线 | 日韩1| 天天添天天操 | 天堂v网| 五月婷婷网站 | 最近的中文字幕免费动漫视频 | 在线亚洲国产精品区 | 黄色免费的视频 | 巨大欧美黑人xxxxbbbb | 特级aaaaaaaaa毛片免费视频 | 97人摸人人澡人人人超一碰 | 夜夜爱夜夜爽夜夜做夜夜欢 | 最刺激黄a大片免费观看下截 | 午夜在线免费视频 | 奇米影视9999 | 久久黄色精品视频 | 国产精选经典三级小泽玛利亚 | 午夜想想爱午夜剧场 | 色婷婷色婷婷 | 99精品视频免费 | 男人边吃奶边爱边做视频日韩 | 91亚洲国产成人久久精品网站 | 夜夜夜精品视频免费 | 日本三级在线播放线观看2021 | sihu影院永久在线影院 | 加勒比一本大道香蕉在线视频 | www.四虎影院在线观看 | www天堂在线 | 亚洲精品老司机综合影院 | 黑人破乌克兰美女处 | 精品videosex性欧美 | 午夜视频福利在线观看 | 中文在线最新版天堂bt | 天堂w |